2

1-2- لیپازها

3

1-2-1- ارتباط ساختار آنزیم لیپاز با عملکرد آن

5

1-3- آنزیم­ها در محیط آلی

6

1-4- مایعات یونی

8

1-5- بیوکاتالیز در مایعات یونی

9

1-5-1- آنزیم­ها در مخلوط­های مایع یونی – آب

10

1-5-2- فعالیت آنزیم­ها در شرایط نسبتا بی­آب در مایعات یونی

11

1-5-3- پایداری آنزیم­ها در مایعات یونی تقریبا بی­آب

13

1-5-4- آنزیم­ها، مایعات یونی، پیوندهای هیدروژنی و فعالیت

13

1-5-5- بیوترانسفورماسیون در محیط مایعات یونی توسط لیپاز­ها و استرازها

14

1-6- بررسی ساختار پروتئین به روش اسپکتروسکوپی فلورسانس

15

فصل دوم: بر پژوهش­های پیشین

 

 

 

2-1- پیشینه کاربرد مایعات یونی در بیوکاتالیز

18

2-2- اثر مایعات یونی مختلف بر فعالیت و پایداری آنزیم

19

2-3- بررسی ساختار آنزیم­ها در مایعات یونی

22

اهداف

23

فرضیه

23

فصل سوم:مواد و روش­ها

 

 

 

3-1- ابزار

25

 

عنوان

صفحه

3-2- مواد

26

3-2-1- مواد لازم جهت تهیه مایعات یونی

26

3-2-2- مواد لازم جهت تهیه آنزیم لیپاز درون سلولی TTL

26

3-2-2-1- سوش باکتری

26

3-2-2-2- مواد مورد نیاز برای ترانسفورماسیون

26

3-2-2-3- مواد مورد نیاز برای کشت باکتری و استخراج عصاره سلولی

26

3-2-2-4- مواد مورد نیاز برای تخلیص آنزیم لیپاز

26

3-2-2-5- مواد مورد نیاز برای سنجش کمی میزان پروتئین و ژل SDS PAGE

27

3-2-3- مواد مورد نیاز برای سنجش فعالیت آنزیمی لیپاز

27

3-2-4- نرم افزارها

27

3-3- روش­ها

28

3-3-1- روش تهیه مایعات یونی

28

3-3-1-1- روش تهیه مایعات یونی با آنیون برمید

28

3-3-1-2- روش تهیه مایعات یونی با آنیون هگزافلوروفسفات

28

3-3-2- روش کشت باکتری و بیان القایی پروتئین نو ترکیب

29

3-3-2-1- محیط کشت باکتریE. coli

29

3-3-2-2- انتقال DNA خارجی به باکتریE.coli

29

3-3-2-2-1- تهیه سلول های مستعد به روش شیمیایی

29

3-3-2-2-2- انتقال پلاسمید به سلول مستعد

30

3-3-2-3- روش تهیه استوک باکتری

31

3-3-2-4- کشت باکتری و القای بیان آنزیم نوترکیب

31

3-3-2-5- بهینه سازی بیان آنزیم نوترکیب

31

3-3-2-5- 1- انتخاب بهترین کلنی از نظر بیان آنزیم TTL

31

3-3-2-5-2- انتخاب بهترین زمان پس از القا

32

3-3-2-6- استخراج عصاره سلولی حاوی لیپاز TTL

32

3-3-3- روش تخلیص آنزیم لیپاز TTL

33

3-3-3-1- روش رسوب دهی دمایی

33

3-3-3-1-1- بهینه سازی رسوب دهی دمایی

33

3-3-3-2- روش تخلیص به کمک ستون کروماتوگرافی

33

3-3-4- روش سنجش کمی پروتئین

34

3-3-4-1- سنجش کمی میزان پروتئین به روش برادفورد

34

3-3-4-2- سنجش کمی میزان پروتئین به روش جذب nm 280

34

 

عنوان

صفحه

3-3-5- الکتروفورز ژل پلی­آکریل آمید با SDS (SDS-PAGE)

35

3-3-5-1- آماده سازی محلول­های الکتروفور

35

3-3-5-2- آماده سازی سیستم الکتروفورز

36

3-3-6- سنجش فعالیت آنزیمی با سوبسترای پارانیتروفنیل پالمیتات

38

3-3-7- روش بررسی فعالیت آنزیمی در حضور غلظت های مختلف از انواع مایعات یونی

39

3-3-8- روش بررسی پایداری دمایی آنزیم TTL در دماهای بالا

39

3-3-9- روش بررسی پایداری آنزیم لیپاز TTL در حضور مایعات یونی مختلف

39

3-3-10- روش بررسی ساختار سوم آنزیم TTL در حضور مایعات یونی

40

فصل چهارم:نتایج

 

 

 

4-1- بهینه سازی بیان آنزیم نوترکیب

42

4-1-1- انتخاب بهترین کلنی از نظر بیان آنزیم TTL

43

4-1-2- بهینه سازی زمان پس از القا

43

4-2- تخلیص آنزیم لیپاز TTL

44

4-2-1- بهینه سازی تخلیص نسبی به روش رسوب دهی دمایی

44

4-2-2- تخلیص به کمک ستون کروماتوگرافی Q- سفاروز

45

4-3- سنتز مایعات یونی

47

4-4- اثر مایعات یونی بر فعالیت هیدرولازی آنزیم TTL

47

4-5- اثر مایعات یونی بر پایداری دمایی آنزیم TTL

48

4-5-1- پایداری دمایی TTL در عدم حضور مایعات یونی

48

4-5-2- پایداری دمایی آنزیم TTL در حضور مایعات یونی

49

4-5-2-1- بررسی پایداری TTL در [C4MIM][Br] و ] [C4MIM][PF6در دماهای مختلف

49

4-5-2-2- مقایسه اثر نوع آنیون مایعات یونی بر پایداری دمایی

51

4-5-2-3- مقایسه اثر نوع کاتیون و طول­های مختلف زنجیره کربنی مایعات یونی بر پایداری دمایی آنزیم

51

4-6- بررسی ساختار سوم آنزیم در حضور و عدم حضور مایعات یونی

54

فصل پنجم:بحث

 

 

 

5-1- اثر مایعات یونی بر فعالیت هیدرولازی آنزیم TTL

57

 

عنوان

صفحه

5-2- اثر مایعات یونی بر پایداری دمایی آنزیم TTL

59

5-3- بررسی ساختار سوم آنزیم در حضور مایعات یونی

61

فصل ششم: نتیجه­گیری و پیشنهادات

 

 

 

6-1- نتیجه­گیری

63

6-2- پیشنهادات

63

فهرست منابع

65

چکیده انگلیسی

75

فهرست جدول­ها

عنوان

 

صفحه

 
جدول1-1- میکروارگانیسم­های تولید کننده لیپاز 4
جدول2-1- آنیون­های متداول در مایعات یونی 19
جدول 3-1- محیط کشت Luria Bertani 29
جدول 3-2- نحوه تهیه محلول TSB 30
جدول 3-3- نحوه تهیه محلول KCM 31
جدول 3-4- نحوه تهیه محلول برادفورد 34
جدول 3-5- نحوه تهیه بافر نمونه 4X 37
جدول 3-6- نحوه تهیه ژل پلی اکریل آمید 37
جدول 3-7- نحوه تهیه مخلوط سنجش فعالیت آنزیم 38
جدول 4-1- فعالیت­های لیپازی عصاره­های سلولی کلنی­های 1 تا 6 حاصل از ترانسفورماسیون 44
جدول 4-2- مشخصات مراحل تخلیص TTL. 46
جدول 5-1- غلظت­های بهینه مایعات یونی (CnMIM Br n=2,4,6) و CMC های مربوطه 58

فهرست شکل­ها

پایان نامه

ی نوشته‌ها


 
 
 
موضوعات: بدون موضوع  لینک ثابت


فرم در حال بارگذاری ...