4

فصل دوم: کلیات

2

5

سلول بنیادی و تاریخچه

2-1

6

تعریف کلی سلول بنیادی

2-2

6

تقسیم بندی سلول­های بنیادی

2-3

6

تقسیم بندی بر اساس قدرت تمایزی

2-3-1

7

تقسیم بندی بر اساس منشاء

2-3-2

8

تمایز سلول­های بنیادی

2-4

8

منابع سلول­های بنیادی

2-5

10

شاخص­های سطحی سلول­های بنیادی

2-6

10

سلول­های بنیادی مزانشیمی

2-7

10

مقدمه

2-7-1

11

آنتی ژن­های فنوتیپیک و ویژگی سلول­های بنیادی مزانشیمی

2-7-2

11

منبع سلول­های بنیادی مزانشیمی

2-7-3

12

جداسازی سلول­های بنیادی مزانشیمی

2-7-4

12

مکانیسمهای انعطاف پذیری سلول­های بنیادی مزانشیمی

2-7-5

13

خود­نوزائی یا خود­تجدیدی سلول­های بنیادی مزانشیمی

2-7-6

13

تمایز سلول­های بنیادی مزانشیمی

2-7-7

14

محرک­های آزمایشگاهی تاثیر گذار بر تمایز سلول­های بنیادی مزانشیمی

2-7-8

14

مورفولوژی سلول­های بنیادی مزانشیمی

2-7-9

14

تاثیر سلول بنیادی مزانشیمی بر روی سیستم ایمنی

2-7-10

15

تاثیر سلول­های بنیادی مزانشیمی بروی لنفوسیت­هایT

2-7-10-1

15

تاثیر سلول­های بنیادی مزانشیمی برسلول­هایTتنظیمی

2-7-10-2

15

تاثیر سلول­های بنیادی مزانشیمی بر لنفوسیت B

2-7-10-3

16

تاثیر سلول­های بنیادی مزانشیمی برسلول­های عرضه كننده آنتی ژن

2-7-10-4

16

حفاظت عصبی سلول­های بنیادی مزانشیمی

2-8

17

فاکتورهای سرکوب سیستم ایمنی سلول­های مزانشیمی

2-9

19

نحوه کاربرد سلول­های بنیادی مزانشیمی

2-10

19

استفاده درمانی از سلول­های بنیادی مزانشیمی

2-11

20

سیستم ایمنی

2-12

20

اجزای سیستم ایمنی

2-12-1

21

التهاب

2-12-2

21

نوتروفیل

2-12-3

22

گرانول­های نوتروفیل

2-12-4

22

فاگوسیتوز

2-12-5

24

انفجار تنفسی

2-12-6

25

آنزیم­های تجزیه کننده

2-12-7

25

فعال شدن نوتروفیل

2-12-8

25

پذیرنده­های سطحی نوتروفیل

2-12-9

26

سرنوشت نوتروفیل­ها

2-12-10

26

انواع مرگ سلولی

2-13

26

آپوپتوز

2-13-1

27

مسیرهای آپوپتوزی

2-13-2

29

ویتامین

2-14

29

انواع ویتامین

2-14-1

30

ویتامینD

2-14-2

32

فصل سوم: مواد و روش کار

3

33

طرز تهیه محیط کشتDMEM

3-1

34

طرز تهیه محیط کشتRPMI

3-2

35

تعیین زنده­مانی و شمارش سلول به روش تریپان بلو

3-3

36

جدا سازی وکشت سلول بنیادی مزانشیمال مغز استخوان رت

3-4

38

تریپسینه کردن وپاساژ دادن سلول­ها

3-5

39

جداسازی نوتروفیل

3-6

41

تیمار سلول های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان رت با ویتامینD3

3-7

41

مجاور­سازی سلول­های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان رت تیمار شده با ویتامینD3و مایع رویی آنها با نوتروفیل های جدا شده ازخون محیطیرت

3-8

41

مجاورسازی سلول­های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان رت تیمار شده با ویتامینD3با سلول­های نوتروفیل

3-8-1

41

مجاور سازی مایع­رویی سلول­های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان تیمار شده با ویتامینD3با سلول­های نوتروفیل

3-8-2

42

فاگوسیتوز مخمر

3-9

42

آماده سازی سوسپانسیون مخمر

3-9-1

43

روش انجام فاگوسیتوز

3-9-2

45

سنجش انفجار تنفسیتوسط احیاء نیتروبلوتترازولیوم (NBT)

3-10

46

سنجش زنده­مانی سلول نوتروفیل در مواجه با سلول­های بنیادی مزانشیمی و مایع رویی آن

3-11

47

آنالیز آماری

3-12

48

فصل چهارم: نتایج

4

49

نتایج مجاورسازی سلول مزانشیمی تیمار شده و سلول نوتروفیل

4-1

49

ارزیابیقابلیت انفجار تنفسی(NBT)

4-1-1

49

ارزیابیفاگوسیتوز

4-1-2

50

ارزیابیآپوپتوز

4-1-3

51

نتایج مجاورسازی مایع رویی سلول مزانشیمی تیمار شده و سلول نوتروفیل

4-2

51

ارزیابیقابلیت انفجار تنفسی(NBT)

4-2-1

52

ارزیابیفاگوسیتوز

4-2-2

53

ارزیابیآپوپتوز

4-2-3

56

فصل پنجم: بحث و پیشنهادات

5

57

بحث

5-1

60

پیشنهادات

5-2

61

فصل ششم: منابع

6

62

منابع

6-1

73

چکیده انگلیسی

فهرست نمودارها

صفحه	عنوان	ردیف
49	ارزیابی قابلیت انفجار تنفسی سلول­های نوتروفیل مجاور شده با سلول­های مزانشیمی تیمار شده با غلظت­های متفاوت ویتامینD3در زمان­های مختلف	4-1
50	ارزیابی قابلیت فاگوسیتوز سلول­های نوتروفیل مجاور شده با سلول­های مزانشیمال تیمار شده با غلظت­های متفاوت ویتامینD3در زمان­های مختلف	4-2
51	ارزیابی میزان آپوپتوز سلول­های نوتروفیل مجاور شده با سلول­های مزانشیمال تیمار شده با غلظت­های متفاوت ویتامینD3در زمان­های مختلف	4-3
52	ارزیابی میزان انفجار تنفسی سلول­های نوتروفیل مجاور شده با مایع­رویی سلول­های مزانشیمی تیمار شده با غلظت­های متفاوت ویتامینD3در زمان­های مختلف	4-4
52	ارزیابی میزان فاگوسیتوز سلول­های نوتروفیل مجاور شده با مایع­رویی سلول­های مزانشیمی تیمار شده با غلظت­های متفاوت ویتامینD3در زمان­های مختلف	4-5
53	ارزیابی میزان آپوپتوز سلول­های نوتروفیل مجاور شده با مایع­رویی سلول­های مزانشیمی تیمار شده با غلظت­های متفاوت ویتامینD3در زمان­های مختلف	4-6

فهرست تصاویر

ی نوشته‌ها

1-4-1-1 تنش آب……………………………………………………………………………………………………… 8

1-5 تاثیر تنش خشکی بر میزان جذب پتاسیم در گیاه………………………………………………………………… 11

1-6 اثرات فیزیولوژیکی تنش خشکی در گیاهان……………………………………………………………………….. 11

1-7 پاسخ روزنه به تنش خشکی……………………………………………………………………………………….. 12

1-7-1 نقش پتاسیم در پاسخ روزنه……………………………………………………………………………………. 13

1-8 اثرات تنش خشکی بر فتوسنتز…………………………………………………………………………………….. 13

1-8-1 نقش پتاسیم در فتوسنتز……………………………………………………………………………………….. 13

1-9 روش­های مقابله گیاه با تنش………………………………………………………………………………………. 13

1-10 کلروفیل­ها………………………………………………………………………………………………………… 14

1-10-1 طیف جذبی کلروفیل­ها……………………………………………………………………………………….. 14

1-11 کاروتنوئیدها……………………………………………………………………………………………………… 15

1-12 ترکیبات فنلی ……………………………………………………………………………………………………. 16

1-13 پرولین……………………………………………………………………………………………………………. 17

1-14 مرور منابع………………………………………………………………………………………………………… 18

1-14-1 تاثیر تنش خشکی بر محتوای پرولین…………………………………………………………………………. 18

1-14-2 تاثیر تنش خشکی بر محتوای پروتئین……………………………………………………………………….. 19

1-14-3 تاثیر تنش خشکی بر محتوای رنگیزه­های فتوسنتزی…………………………………………………………. 19

1-14-4 بررسی اثر تنش خشکی بر محتوای MDA…………………………………………………………………… 20

1-14-5 بررسی اثر تنش خشکی بر محتوای فنول تام…………………………………………………………………. 20

1-14-6 بررسی اثر تنش خشکی بر محتوای پتاسیم برگ…………………………………………………………….. 21

1-14-7 نحوه عملکرد نانو مواد در تنش خشکی………………………………………………………………………. 21

1-15 اهداف پژوهش……………………………………………………………………………………………………. 23

فصل دوم

2- مواد و روش­ها…………………………………………………………………………………………………… 24

2-1- تجهیزات و مواد شیمیایی…………………………………………………………………………………………. 25

2-1-1 مواد شیمیایی…………………………………………………………………………………………………… 25

2-1-2 تجهیزات ……………………………………………………………………………………………………….. 25

2-1-3 ابزار و لوازم مصرفی……………………………………………………………………………………………… 26

2-2 مشخصات نمونه گیاهی……………………………………………………………………………………………. 26

• آماده سازی اتاق کشت……………………………………………………………………………………………… 26

2-4 آبیاری………………………………………………………………………………………………………………. 27

2-5 آماده­سازی گلدان­ها………………………………………………………………………………………………… 27

2-5-1 تهیه­ی محلول هوگلند………………………………………………………………………………………….. 27

• اعمال تنش خشکی…………………………………………………………………………………………………. 30

• تیماردهی…………………………………………………………………………………………………………… 30

• نمونه­برداری………………………………………………………………………………………………………… 30

2-9 سنجش پرولین…………………………………………………………………………………………………….. 30

2-10 سنجش پروتئین کل به روش برادفورد………………………………………………………………………….. 31

2-10-1 تهیة معرف برادفورد…………………………………………………………………………………………… 31

2-10-2 ترسیم منحنی استاندارد………………………………………………………………………………………. 32

2-11 سنجش كلروفیل و كاروتنوئید ………………………………………………………………………………….. 32

2-12 اندازه­گیری مالون دی آلدهید……………………………………………………………………………………. 33

2-13 استخراج آنتی اکسیدان­های غیرآنزیمی………………………………………………………………………….. 33

2-13-1 سنجش آنتی اکسیدان­های غیرآنزیمی……………………………………………………………………….. 34

2-13-1-1 سنجش فنل تام……………………………………………………………………………………………. 34

2-13-1-2 رسم منحنی استاندارد گالیک اسید……………………………………………………………………….. 34

2-14 اندازه گیری پتاسیم به روش نشر شعله (AES)………………………………………………………………… 35

2-14-1 تهیه عصاره گیاه به روش سوزاندن خشک و ترکیب باHCL ………………………………………………. 35

2-14-2 تهیه محلول ها………………………………………………………………………………………………… 36

2-14-3 روش کار………………………………………………………………………………………………………. 36

2-15 تجزیه آماری……………………………………………………………………………………………………… 37

فصل سوم

3- نتایج…………………………………………………………………………………………………………………. 38

3-1 اندازه­گیری مقادیر پرولین………………………………………………………………………………………….. 39

3-1-1 نتایج حاصل از سنجش پرولین در چین اول…………………………………………………………………… 39

3-1-2 نتایج حاصل از سنجش پرولین در چین دوم…………………………………………………………………… 40

3-1-3 نتایج حاصل از سنجش پرولین در چین سوم………………………………………………………………….. 40

3-2 اندازه­گیری مقادیر پروتئین………………………………………………………………………………………… 42

3-2-1 نتایج حاصل از سنجش پروتئین در چین اول………………………………………………………………….. 42

3-2-2 نتایج حاصل از سنجش پروتئین در چین دوم………………………………………………………………….. 43

3-2-3 نتایج حاصل از سنجش پروتئین در چین سوم…………………………………………………………………. 44

3-3 رنگیزه­های فتوسنتزی……………………………………………………………………………………………… 46

3-3-1 کلروفیل a………………………………………………………………………………………………………. 46

3-3-1-1 نتایج حاصل از سنجش کلروفیل a در چین اول……………………………………………………………. 46

3-3-1-2 نتایج حاصل از سنجش کلروفیل a در چین دوم……………………………………………………………. 47

3-3-1-3 نتایج حاصل از سنجش کلروفیل a در چین سوم…………………………………………………………… 48

3-3-2 کلروفیل b………………………………………………………………………………………………………. 49

3-3-2-1 نتایج حاصل از سنجش کلروفیل b در چین اول……………………………………………………………. 49

3-3-2-2 نتایج حاصل از سنجش کلروفیل b در چین دوم……………………………………………………………. 50

3-3-2-3 نتایج حاصل از سنجش کلروفیل b در چین سوم…………………………………………………………… 51

3-3-3 کلروفیل کل…………………………………………………………………………………………………….. 53

3-3-3-1 نتایج حاصل از سنجش کلروفیل کل در چین اول………………………………………………………….. 53

3-3-3-2 نتایج حاصل از سنجش کلروفیل کل در چین دوم………………………………………………………….. 53

3-3-3-3 نتایج حاصل از سنجش کلروفیل کل در چین سوم…………………………………………………………. 54

3-3-4 کاروتنوئید………………………………………………………………………………………………………. 55

3-3-4-1 نتایج حاصل از سنجش کاروتنوئید در چین اول……………………………………………………………. 55

3-3-4-2 نتایج حاصل از سنجش کاروتنوئید در چین دوم……………………………………………………………. 56

3-3-4-3 نتایج حاصل از سنجش کاروتنوئید در چین سوم…………………………………………………………… 57

3-4 اندازه­گیری پراکسیداسیون لیپیدی………………………………………………………………………………… 58

3-4-1 نتایج حاصل از سنجش پراکسیداسیون لیپیدی در چین اول………………………………………………….. 58

3-4-2 نتایج حاصل از سنجش پراکسیداسیون لیپیدی در چین دوم………………………………………………….. 59

3-4-3 نتایج حاصل از سنجش پراکسیداسیون لیپیدی در چین سوم…………………………………………………. 60

3-5 اندازه گیری غلظت فنل……………………………………………………………………………………………. 62

3-5-1 نتایج حاصل از اندازه­گیری فنل تام در چین اول……………………………………………………………….. 62

3-5-2 نتایج حاصل از اندازه­گیری فنل تام در چین دوم………………………………………………………………. 63

3-5-3 نتایج حاصل از اندازه­گیری فنل تام در چین سوم………………………………………………………………. 64

3-6 اندازه­گیری مقادیر پتاسیم برگ……………………………………………………………………………………. 65

3-6-1 نتایج حاصل از مقادیر پتاسیم برگ با استفاده از روش نشر شعله در چین اول……………………………….. 65

3-6-2 نتایج حاصل از مقادیر پتاسیم برگ با استفاده از روش نشر شعله در چین دوم……………………………….. 66

3-6-3 نتایج حاصل از مقادیر پتاسیم برگ با استفاده از روش نشر شعله در چین سوم………………………………. 67

فصل چهارم

4- بحث و نتیجه­گیری………………………………………………………………………………………………….. 69

4-1 اثرات تنش خشکی بر اندازه­گیری پرولین………………………………………………………………………….. 70

4-2 اثرات تنش خشکی بر اندازه­گیری پروتئین………………………………………………………………………… 71

4-3 اثرات تنش خشکی بر اندازه­گیری رنگیزه­های فتوسنتزی………………………………………………………….. 71

4-4 تاثیر تنش بر پراکسیداسیون لیپیدی………………………………………………………………………………. 72

4-5 تاثیر تنش بر فنول تام……………………………………………………………………………………………… 74

4-6 تاثیر تنش بر مقدار پتاسیم برگ…………………………………………………………………………………… 74

4-7 نتیجه­گیری………………………………………………………………………………………………………… 75

4-8 پیشنهادات…………………………………………………………………………………………………………. 76

منابع……………………………………………………………………………………………………………………… 77

فهرست اشکال

2-1 نمایی از اتاقک کشت………………………………………………………………………………………………. 26

شکل 2-2 رشد گیاه در اتاق کشت……………………………………………………………………………………… 30

شکل 3-1 تغییرات مقادیر پرولین در چین اول…………………………………………………………………………. 39

شکل 3-2 تغییرات مقادیر پرولین در چین دوم………………………………………………………………………… 40

شکل 3-3 تغییرات مقادیر پرولین در چین سوم……………………………………………………………………….. 40

شکل 3-4 میانگین تغییرات مقادیر پرولین در چین اول، دوم و سوم………………………………………………….. 42

شکل 3-5 تغییرات مقادیر پروتئین در چین اول……………………………………………………………………….. 43

شکل 3-6 تغییرات مقادیر پروتئین در چین دوم……………………………………………………………………….. 44

شکل 3-7 تغییرات مقادیر پروتئین در چین سوم………………………………………………………………………. 45

شکل 3-8 میانگین تغییرات مقادیر پروتئین در چین اول، دوم و سوم…………………………………………………. 46

شکل 3-9 تغییرات مقادیر کلروفیل a در چین اول…………………………………………………………………….. 47

شکل 3-10 تغییرات مقادیر کلروفیل a در چین دوم…………………………………………………………………… 47

شکل 3-11 تغییرات مقادیر کلروفیل a در چین سوم………………………………………………………………….. 48

شکل 3-12میانگین تغییرات مقادیر کلروفیل a در چین اول، دوم و سوم……………………………………………… 49

شکل 3-13 تغییرات مقادیر کلروفیل b در چین اول…………………………………………………………………… 50

شکل 3-14 تغییرات مقادیر کلروفیل b در چین دوم………………………………………………………………….. 51

شکل 3-15 تغییرات مقادیر کلروفیل b در چین سوم………………………………………………………………….. 52

شکل 3-16 میانگین تغییرات مقادیر کلروفیل b در چین اول، دوم و سوم…………………………………………….. 52

شکل 3-17 تغییرات مقادیر کلروفیل کل در چین اول…………………………………………………………………. 53

شکل 3-18 تغییرات مقادیر کلروفیل کل در چین دوم…………………………………………………………………. 54

شکل 3-19 تغییرات مقادیر کلروفیل کل در چین سوم………………………………………………………………… 54

شکل 3-20 میانگین تغییرات مقادیر کلروفیل کل در چین اول، دوم و سوم…………………………………………… 55

شکل 3-21 تغییرات مقادیر کاروتنوئید در چین اول…………………………………………………………………… 56

شکل 3-22 تغییرات مقادیر کاروتنوئید در چین دوم…………………………………………………………………… 56

شکل 3-23 تغییرات مقادیر کاروتنوئید در چین سوم………………………………………………………………….. 57

شکل 3-24 میانگین تغییرات مقادیر کاروتنوئید در چین اول، دوم و سوم…………………………………………….. 58

شکل 3-25 تغییرات مقادیر مالون دی آلدهید در چین اول……………………………………………………………. 59

شکل 3-26 تغییرات مقادیر مالون دی آلدهید در چین دوم…………………………………………………………… 60

شکل 3-27 تغییرات مقادیر مالون دی آلدهید در چین سوم………………………………………………………….. 61

شکل 3-28 میانگین تغییرات مقادیر مالون دی آلدهید در چین اول، دوم و سوم…………………………………….. 62

شکل 3-29 تغییرات مقادیر فنل تام در چین اول………………………………………………………………………. 63

شکل 3-30 تغییرات مقادیر فنل تام در چین دوم………………………………………………………………………. 63

شکل 3-31 تغییرات مقادیر فنل تام در چین سوم……………………………………………………………………… 64

شکل 3-32 میانگین تغییرات مقادیر فنل تام در چین اول، دوم و سوم………………………………………………… 65

شکل 3-33 تغییرات مقادیر پتاسیم در چین اول………………………………………………………………………. 66

شکل 3-34 تغییرات مقادیر پتاسیم در چین دوم………………………………………………………………………. 66

• اهمیت اقتصادی بلوط———— 10

• تنوع ژنتیکی-بلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد– 11

1-11-1- اهمیت تنوع ژنتیکی و روش­های مختلف ارزیابی آنبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد————– 12

• انواع نشانگرها-بلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد 12

1-12-1- نشانگرهای مورفولوژیکی– 13

1-12-2- نشانگرهای بیوشیمیایی— 13

1-12-3- نشانگرهای مولکولی مبتنی بر DNA ——— 14

1-12-3-1- نشانگرهای غیر مبتنی برPCR ——- 15

1-12-3-2- نشانگرهای مبتنی برPCR ———- 16

1-12-3-2-1 نشانگرPAPD ———– 17

1-12-3-2-2 نشانگرAFLP ———— 17

1-12-3-2-3 نشانگرSSR ————- 17

1-12-3-2-4 نشانگرISSR ———— 18

1-12-3-2-5 نشانگرSRAP و مزایا و معایب آنبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد————- 19

• کاربرد نشانگر(مارکر)هایDNA — 20

• واکنش زنجیره­ای پلیمراز(PCR)—- 21

1-14-1- مراحل واکنش زنجیره­ای پلیمراز————- 22

• تجزیه و تحلیل داده­ها———— 24

1-15-1 دندروگرام————- 24

1-15-2 تجزیه خوشه ای——— 25

1-15-3 ضریب شباهت———- 26

1-15-4 انتخاب الگوریتم——— 26

• بررسی كارآیی الگوریتم مورد استفاده در تجزیه كلاستر—– 26

• شاخص شانون-بلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد 27

• بررسی تنوع و تفاوت ژنتیکی بین جمعیت­ها براساس آنالیز Neiبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد————– 27

• سابقه تحقیق-بلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد– 28

1-15-1- مروری بر برخی پژوهش­های انجام شده بر رویQuercus brantiiLindl.———— 28

1-15-2- مروری بر برخی پژوهش­های انجام شده با استفاده از نشانگرSRAPبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد– 28

فصل دوم: مواد و روش­ها

2-1- انتخاب مناطق و جمعیت­ها— 33

2-2- جمع­آوری نمونه ها و آماده سازی آنها 34

2-3- استخراج DNA از نمونه های گیاهی- 34
2-3-1- آماده کردن نمونه ها 34

2-3-2- استخراج DNA– 35

2-3-2-1- مواد موردنیاز 35

2-3-2-2- روش کار- 36

2-4- تعیین كیفیت وكمیت DNA– 37

2-5- واكنش زنجیره ای پلیمراز) (PCR– 39

2-6- الکتروفورز- 41

2-6-1- محلول اتیدیوم بروماید- 42

2-6-2- تهیه ژل الکتروفورز- 43

2-6-3- الکتروفورز محصول PCR– 43

2-7- تجزیه و تحلیل داده ها44

فصل سوم: نتایج و بحث

3-1پلی­مورفیسم -بلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد——- 46

3-2 بررسی پارامترهای اصلی تنوع ژنتیکی همه لوکوس­ها در جمعیت­های گونهQuercus brantiiLindl.——- 50

3-3 بررسی تنوع و تفاوت ژنتیکی بین جمعیت­ها براساس آنالیز Nei—- 52

3-4 شباهت و فاصله ژنتیکی بین 5 جمعیت—– 54

3-5 بحث و نتیجه­گیری کلی—————- 55

3-6 پیشنهادات-بلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد——– 59

منابع– 62

فهرست شکل­ها

شکل1- 1 پراکندگی جهانی جنس بلوط (Quercus)————- 6

شکل 1-2 پراکندگی جنس بلوط(Quercus) در ایران———— 7

شکل 1-3 نمایی از گونهQuercus brantiiLindl.———— 10

شکل 1-4 نحوه اتصال پرایمرهای forward و reverse به DNA الگوبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد————– 20

شکل 1-5 واکنش زنجیره­ای پلی­مراز——— 24

شکل2- 1 جمعیت­ها و مناطق بررسی شده در این تحقیق———– 33

شکل2-2 نمونه­های برگ تازه در آزمایشگاه—– 34

شکل 2-3 دستگاه اسپکتروفتومتر برای تعیین کمیت DNA——– 38

شکل 2-4 دستگاه ترموسایکلر————- 41

شکل 2-5 دستگاه الکتروفورز عمودی——– 42

شکل 2-6 ساختار اتیدیوم برماید———– 42

شکل 2-7 دستگاه ژل داک—————- 43

شکل 3-1 الگوی باندی پرایمر————– 46

شکل 3-2 دندروگرام ژنوتیپ های مورد بررسی– 55

فهرست جداول:

جدول 2-1 اسامی جمعیت­ها و مناطق بررسی شده در این تحقیق—- 33

جدول 2-2 مواد استفاده شده در PCR—— 39

جدول 2-3 برنامهPCR -بلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد 40

جدول 2-4 پرایمرهای مورداستفاده در آزمایش- 40

جدول 3-1 نتایج کدگذاری آغازگر Me2-Em2 برای همه­ی جمعیت­هابلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد————– 47

٢-٣-٢ :بیماری آلزایمر با شروع دیررس.. 22

٣-٣-٢ : ژن APOE. 22

25

٤-٢ : بررسی تحقیقات انجام شده 29

فصل سوم: مواد و روش ها

١-٣: روش شناسی تحقیق. 35

١-١-٣ : نوع مطالعه. 35

٢-١-٣ : جامعه آماری. 35

٣-١- ٣: معیار DSM-Ⅳ… 35

٤-١-٣ : معیارهای انتخاب بیماران. 37

٥-١-٣: روش جمع آوری دادهها 37

٥-١-٣: تعریف عملیاتی متغیرها و مقیاس اندازهگیری. 37

٦-١-٣: ملاحظات اخلاقی. 37

٢-٣: روش اجرا 38

١-٢-٣ : استخراج DNA.. 38

٢-٢-٣)روش استخراج DNA با استفاده از کلروفرم: 41

روش تهیه محلولهای مورد نیازجهت استخراج DNA: 42

٣-٣) سنجش کیفیت و کمیتDNA.. 44

١-٣-٣) سنجش کمیت و کیفیت DNA با استفاده از نانودراپ.. 44

٢-٣-٣) ارزیابی کیفیت DNA استخراج شده به کمک ژل آگارز (الکتروفورز افقی) 44

٤-٣) ژنوتایپ کردن نمونه ها)ژنوتایپینگ) 47

٣-٥: آنالیز آماری. 51

مشخصات افراد شرکت کننده در مطالعه. 54

فصل چهارم: نتایج

١- ٤: تجزیه و تحلیل آماری برای پلی مورفیسم (G/A) ٢٤٢٥٥٧rs ژن MAPT. 54

١-١-٤: مقایسه ژنوتیپ های پلی مورفیسم (G/A) ٢٤٢٥٥٧rs ژن MAPT در دو گروه بیمار و سالم 54

٢-١-٤: مقایسه آلل های پلی مورفیسم G/A) ٢٤٢٥٥٧rs ژن MAPT در دو گروه بیمار و سالم 55

٢- ٤: تجزیه و تحلیل آماری برای پلی مورفیسم ژن APOE در دو گروه بیمار و سالم. 55

١-٢-٤ :مقایسه ژنوتیپهای پلی مورفیسم (٤٢٩٣٥٨ rs ) و (٧٤١٢rs) ژن APOE در در افراد٢ e APOE و٤e APOE در دو گروه بیمار و سالم. 55

٢-٢-٤: مقایسه آلل های پلی مورفیسم ژن APOE در دو گروه بیمار و سالم. 56

٣-٤ ) بررسی اثر متقابل ژنوتیپ های پلی مورفیسم G/A) ٢٤٢٥٥٧rs ژن MAPT با ژنوتیپ های ژن APOE 57

٤-٤ : نتایج حاصل از PCR قطعات مورد نظر در ژن های MAPT و APOE. 57

فصل پنجم: بحث و پیشنهادات

١-٥ ) بحث.. 60

٢-٥ ) نتیجه گیری. 61

١-٢- ٥)نتایج پلی مورفیسم rs242557(G/A مربوط به ژن MAPT. 61

٢-٢-٥) نتایج پلی مورفیسم (٤٢٩٣٥٨ rs ) و (٧٤١٢rs) مربوط به ژن APOE. 62

٣-٥ ) پیشنهادات.. 63

منابع

REFRENCE: 65

Introduction: 72

فهرست جداول:

عنوانصفحه

جدول ١-٣مشخصات کلی پرایمرها…………………………………………………………………………………… 48

جدول ٢ -٣…………………………………………………………………………………………………………………. 49

جدول ٣-٣ برنامه مورد استفاده جهت انجام PCRژMAPT .. 50

جدول ١-١-٤: بررسی توزیع ژنوتیپ ها در دو گروه بیمار و کنترل……………………………………………………………… 54

جدول ٢-١-٤: بررسی همسا نی توزیع آلل ها در دو گروه بیمار و سالم……………………………………………………….. 55

جدول ١-٢-٤ : بررسی توزیع ژنوتیپ ها در دو گروه بیمار و کنترل………………………………………………………………. 56

جدول ٢-٢-٤: بررسی همسانی توزیع آلل ها در دو گروه بیمار و سالم…………………………………………………………. 56

فهرست شکل ها:

عنوانصفحه

شکل ١-١ ) در این شکل نورون های سا لم با نورونهای دارای شاخص های بیماری آلزایمر مقایسه شده است 3

شکل٢-١ : در این شکل ایزوفرم های گوناگون تائو به نمایش در آمده اند. 7

شکل ١-٢ : پلاکهای پیری آمیلوئید و NFT مشاهده شده در مغز بیماران مبتلا به آلزایمر………………………. 14

شکل٢-٢: سیستم لیمبیک و نواحی درگیر در بیماری آلزایمر……………………………………………………………………….. 15

شکل١-٤-٤ : محصول PCR مربوط به ژن MAPT ، همانگونه که مشاهده می شود،طول قطعه ی کنترل ، موتانت و نرمال به ترتیب ٣٤٠ ، ١٦٧،٢٢٨ نو کلئو تید می باشند…………………………………………………………………………………………. 58

شکل ٢-٤-٤: محصول PCR مربوط به ژن APOE در دو جایگاه (لوکوس) ١١٢و ١٥٨……………………… 58

چکیده :

1-3-5-7- آﻧﺘﯽ ژن آﻧﺪوﮐﺎردﯾﺘﯽاﻧﺘﺮوﮐﻮكوس ﻓﮑﺎﻟﯿﺲ((EfaA 23

1-3-5-7-1- ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦ.. 24

1-3-5-8- ادهسین ﮐﻼژن اﻧﺘﺮوﮐﻮكوس ﻓﮑﺎﻟﯿﺲ(ACE) 24

1-4- اپیدمیولوژی انتروکوکوس فکالیس…..27

1-5- اهمیت بالینی…28

1-5-1- بیماریزایی: 29

1-5-1-1- باکتریمی: 29

1-5-1-2- ﻋﻔﻮﻧﺖ ﻣﺠﺎری ادراری: 32

1-5-1-3- اندوکاردیت.. 33

1-5-1-4- ﻋﻔﻮﻧﺖ ﻫﺎی داﺧﻞ ﺷﮑﻤﯽ، ﻟﮕﻨﯽ و ﺑﺎﻓﺘﻬﺎی ﻧﺮم. 33

1-5-1-5- ﺳﺎﯾﺮﻋﻔﻮﻧﺘﻬﺎی اﻧﺘﺮوکوکی.. 35

1-6- درمان..36

1-7- مقاومتهای آنتی بیوتیکی37

1-7-1- ﻣﻘﺎوﻣﺖ آﻧﻬﺎ ﺑﻪ ﮔﻠﯿﮑﻮﭘﭙﺘﯿﺪﻫﺎ 39

1-7-2- ﻣﻘﺎوﻣﺖ ﺑﻪ آﻧﺘﯽ ﺑﯿﻮﺗﯿﮑﻬﺎی ﺑﺘﺎﻻﮐﺘﺎم. 40

1-7-3- ﻣﻘﺎوﻣﺖ ﺑﻪآنتی بیوتیکهای ﺗﺘﺮاﺳﺎﯾﮑﻠﯿﻦ.. 41

1-7-4- مقاومت در برابر آنتی بیوتیک های ماکرولیدی.. 42

1-7-5- ﻣﻘﺎوﻣﺖ ﺑﻪ ﮐﻠﺮاﻣﻔﻨﯿﮑﻞ. 43

1-7-6- مقاومت به آمینوگلیکوزید ها 44

1-7-6-1- تاریخچه روند گسترش مقاومتهای آمینوگلیکوزیدی.. 45

1-7-6-2- انواع مقاومت به آمینوگلیکوزیدها 46

1-7-6-3- اهمیت مقاومت آمینوگلیکوزیدی.. 48

1-7-7- ﻣﻘﺎوﻣﺖ ﭼﻨﺪ داروﺋﯽ.. 42

1-7-8- HLAR و افزایش مرگ و میز (Mortality) 42

1-8-PCR..44

1-8-1- Multiplex PCR. 44

1-8-2- طراحی و اجرای Multiplex PCR. 45

1-8-3- تیتراسیون اجزای واکنش: 46

1-8-4- شرایط ترموسایکلر: 47

1–9–تعریف واژه ها.47

فصل دوم

( مبانی و تاریخچه) 51

2- مروری بر منابع. 52

فصل سوم

مواد و روش ها 62

3- مواد و روش ها 62

3-1- ﻧﮕﻬﺪاری ﺳﻮﯾﻪ ﻫﺎ:62

3–2–ﻣﺤﯿﻂ ﻫﺎی ﮐﺸﺖ ﻣﻮرد اﺳﺘﻔﺎده62

3-3- لوازم و تجهیزات مورد استفاده.62

3-4- محلولهای مورد استفاده و نحوه تهیه آنها.64

3-5- آزمایش های بیوشیمیایی…66

3-5-1- ﺗﺴﺖ ﮐﺎﺗﺎﻻز. 66

3-5-2- ﺗﻤﺎﯾﺰاﻧﺘﺮوکوک­ها از ﺳﺎﯾﺮ اﺳﺘﺮﭘﺘﻮکوک­ها 67

3-5-3- ﮐﺸﺖ ﺑﺮ روی ﺑﺎﯾﻞ اﺳﮑﻮﻟﯿﻦ آﮔﺎر. 67

3-5-4- ﺗﺴﺖ ﺗﺨﻤﯿﺮ ﻗﻨﺪآراﺑﯿﻨﻮز. 67

3-6- رﺷﺪ در 10 و 45 درﺟﻪ ﺳﺎﻧﺘﯿﮕﺮاد68

3-7- ﺗﻌﯿﯿﻦ اﻟﮕﻮی ﺣﺴﺎﺳﯿﺖ آﻧﺘﯽ ﺑﯿﻮﺗﯿﮑﯽ انتروکوکوس فکالیس…..68

3-7-1- استاندارد نیم مک فارلند سولفات باریم: 70

3-7-2- آﻣﺎده ﮐﺮدن ﺳﻮﺳﭙﺎﻧﺴﯿﻮن ﺑﺎﮐﺘﺮی : 71

3-7-3- روش اﻧﺠﺎم آزﻣﺎﯾﺶ: 71

3-7-4- بررسی مقاومت افزایش یافته به جنتامایسین و استرپتومایسین.. 72

3-7-5- اﺳﺘﺨﺮاج DNA 73

3-7-5-1- استخراج از باکتری کشت داده شده : 73

3-7-6- اندازه گیری غلظت DNA ژنومیك تخلیص شده 73

3-7-7- انتخاب و تهیه پرایمر های مناسب.. 73

3-7-7-1- محلول کار پرایمر PCR. 73

3-7-8- روش اجرا Multiplex PCR. 73

3-7-8-1- PCR Amplification: 74

3-7-9- آشکارسازی محصولات PCR. 74

3-7-10- روش انجام الکتروفورز: 76

3-8- روش تجزیه و تحلیل داده ها:77

3-9- ملاحظات اخلاقی:78

3-10- مشكلات ومحدویت ها:78

3-11- متغیر ها:79

فصل چهارم

4- نتایج مطالعه. 81

4-1- نتایج مربوط به تست بیوشیمیایی…81

4-2- نتایج مربوط تفکیک جنسیت تمام نمونه ها.82

4-3- نتایج مربوط به تفکیک جنسیت تمام نمونه ها.82

4-4- نتایج مربوط به تفکیک گروه های سنی…83

4-5- نتایج مربوط به حساسیت آنتی بیوتیکی…83

4-5-1- نتایج بررسی مقاومت افزایش یافته به جنتامایسین و استرپتومایسین.. 83

4-6- نتایج مربوط به واکنش زنجیره ای پلی مراز.84

4-6-1- استخراج ژنوم. 87

4-6-2- واکنش PCR. 90

4-6-3- نتایج مربوط به الکتروفورز محصولات PCR : 91

فصل پنجم

بحث و پیشنهادات.. 102

منابع: 111

منابع: 111

فهرست اشکال

شکل ‏1‑1: ساختار فضایی استرپتومایسین.. 36

شکل ‏1‑2: ساختار فضایی کانامایسین.. 37

شکل ‏1‑3: ساختار فضایی آمیکاسین.. 37

شکل ‏1‑4: ساختار فضایی جنتامایسین.. 37

شکل ‏4‑1: الف) شکل سمت چپ کلونی های رشد کرده انتروکوک بر روی بلادآگار را نشان می دهد. ب) شکل سمت راست محیط کشت بایل اسکولین آگار در شبشه های دربسته 5 سی سی می باشد، تیره شدن محیط که نشان دهنده کمپلس آهن و اسکولین می باشد، رشد باکتری را تایید می کند. 77

شکل 43‑2: نتایج تست آرابینوز برای تفکیک سویههای مورد بررسی از همدیگر. 78

شکل 4‑3 : نتایج حاصل از تفکیک نمونههای جمع آوری شده بر اساس جنسیت مورد بررسی. 78

شکل ‏4‑4: نتایج حاصل از تفکیک نمونههای انتروکوکوس فکالیس در افراد مورد بررسی.. 79

شکل ‏4‑5: نتایج حاصل از تفکیک نمونههای انتروکوکوس فاسیوم در افراد مورد بررسی. 79

شکل ‏4‑6 نتایج مربوط به گروه های سنی که در پژوهش حاضر مورد ارزیابی قرار گرفتند. 80

شکل ‏4‑7: نتایج مربوط به گروه های سنی نمونه های انتروکوکس فکالیس…. 81

شکل ‏4‑8: نتایج حاصل از وضعیت گروههای سنی در ارتباط با نمونههای انتروکوکوس فاسیوم. 81

شکل ‏4‑9 : تعیین حساسیت آنتی بیوتیکی به روش دیسک دیفیوژن. از انتروکوکوس فکالیس ATCC29212 نیز به عنوان کنترل منفی استفاده گردید. 82

شکل ‏4‑10: از مجموع تمام نمونه های انتروکوکوس فکالیس بدست آمده، تعیین حساسیت آنتی بیوتیکی به روش دیسک دیفیوژن صورت پذیرفت. از انتروکوکوس فکالیس ATCC29212 نیز به عنوان کنترل منفی استفاده گردید. 82

شکل ‏4‑11: مقاومت آنتی بیوتیکی انواع نمونه ها به جنتامایسین.. 84

شکل 4‑12: مقاومت آنتی بیوتیکی انواع نمونه ها به استرپتومایسین.. 85

فهرست جداول

جدول ‏4‑1: پرایمرهای استفاده شده در این مطالعه برای پیدا کردن سویه های مقاوم به آمینوگلیکوزید. 69

جدول ‏4‑1: نتایج مربوط به جنسیت نمونه های مثبت بدست آمده. مشخص شده است. 80

جدول ‏4‑2: نتایج بررسی مقاومت افزایش یافته به جنتامایسین و استرپتومایسین برای انتروکوکوس فکالیس 83

جدول ‏4‑3: نتایج بررسی مقاومت افزایش یافته به جنتامایسین و استرپتومایسین برای انتروکوکوس فاسیوم 83

چکیده