پایان نامه ارشد:جداسازی هم زمان ژنهای عامل مقاومت افزایش یافته به آمینوگلیکوزیدهاaac(6ʹ)-Ie-aph(2ʹʹ)-Ia ، ant(4)-Іa،aph(3ʹ)-IIIa در انتروکوک … |
2-3-8-پروتئین سطحی انتروکوکی (ESP )……………………………………………………………………………………………………… 11
2-3-9-ادهسین کلاژن انتروکوکوس فکالیس (ACE )………………………………………………………………………………………. 12
2-4-بیماری زایی……………………………………………………………………………………………………………………………………………… 12
2-4-1-باکتریمی……………………………………………………………………………………………………………………………………………… 12
2-4-2-عفونت های مجاری ادراری…………………………………………………………………………………………………………………. 13
2-4-3-اندوکاردیت…………………………………………………………………………………………………………………………………………. 13
2-4-4-عفونت های داخل شکمی، لگنی وبافت های نرم………………………………………………………………………………….. 13
2-4-5-سایر عفونت های انتروکوکی……………………………………………………………………………………………………………….. 14
2-5-شناسایی انترکوکها…………………………………………………………………………………………………………………………………… 14
2-6-درمان انترکوکها………………………………………………………………………………………………………………………………………. 15
2-6-1-مقاومت آنتی بیوتیکی…………………………………………………………………………………………………………………………… 16
2-6-1-1-مقاومت به گلیکوپپتیدها………………………………………………………………………………………………………………….. 17
2-6-1-1-الف- عوامل زمینه ساز کلنیزاسیون انتروکوک های مقاوم به ونکومایسین(VRE)……………………………… 17
2-6-1-2-مقاومت به آنتی بیوتیک های بتالاکتام……………………………………………………………………………………………… 19
2-6-1-3-مقاومت به آنتی بیوتیک های تتراسایکلین……………………………………………………………………………………….. 20
2-6-1-4-مقاومت به لینکوزامیدها………………………………………………………………………………………………………………….. 20
2-6-1-5-مقاومت به استرپتوگرامین B وA……………………………………………………………………………………………………… 21
2-6-1-6-مقاومت به اگزازولیدون…………………………………………………………………………………………………………………… 21
2-6-1-7-مقاومت به اورنی مایسین………………………………………………………………………………………………………………… 22
2-6-1-8-مقاومت در برابر آنتی بیوتیک های ماکرولیدی…………………………………………………………………………………. 22
2-6-1-9-مقاومت به کلرامفنیکل…………………………………………………………………………………………………………………….. 23
2-6-1-10-مقاومت به آمینوگلیکوزیدها…………………………………………………………………………………………………………. 24
2-6-1-10-الف- تاریخچه روند گسترش مقاومت های آمینوگلیکوزیدی……………………………………………………….. 25
2-6-1-10-ب- انواع مقاومت به آمینوگلیکوزیدها…………………………………………………………………………………………. 25
2-6-1-10-پ- اهمیت مقاومت آمینوگلیکوزیدی………………………………………………………………………………………….. 27
2-6-1-10-ت-HLAR و و افزایش مرگ ومیر……………………………………………………………………………………………….. 28
2-6-2-مقاومت چنددارویی( MDR)……………………………………………………………………………………………………………….. 28
2-7- روش های شناسایی سویه های مقاوم به آنتی بیوتیک……………………………………………………………………………….. 29
2-7-1- روش های مبتنی بر فنوتیپ………………………………………………………………………………………………………………… 29
2-7-1-1- روش انتشار دیسک در آگار( دیسک دیفیوژن)……………………………………………………………………………….. 29
2-7-1-2- روش تهیه رقت در محیط مایع( براث دیلوشن )…………………………………………………………………………….. 30
2-7-1-3 – روش تهیه رقت در محیط آگار( آگار دیلوشن )…………………………………………………………………………….. 30
2-7-2- روش های مبتنی بر ژنوتیپ………………………………………………………………………………………………………………… 31
2-7-2-1-Triplex-PCR……………………………………………………………………………………………………………………………….. 31
2-7-2-1-الف-طراحی واجرایTriplex-PCR……………………………………………………………………………………………….. 32
2-7-2-1-ب-تیتراسیون اجزای واکنش………………………………………………………………………………………………………….. 33
2-7-2-1-3 -شرایط ترموسایکلر……………………………………………………………………………………………………………………. 33
2-8-اپیدمیولوژی عفونت های انتروکوکی…………………………………………………………………………………………………………. 33
2-9-مروری بر پیشینه پژوهش………………………………………………………………………………………………………………………….. 35
فصل سوم–مواد و روشها
3-1-وسایل موردنیاز…………………………………………………………………………………………………………………………………………. 40
3-2-مواد موردنیاز……………………………………………………………………………………………………………………………………………. 41
3-3-طریقه ساخت محیط های کشت………………………………………………………………………………………………………………… 43
3-3-1-محیط بلادآگار…………………………………………………………………………………………………………………………………….. 43
3-3-2-محیط BHI براث…………………………………………………………………………………………………………………………………. 43
3-3-3-محیط مولر هینتون آگار……………………………………………………………………………………………………………………….. 44
3-3-4-محیط پایه قند……………………………………………………………………………………………………………………………………… 44
3-4-جمع آوری نمونه……………………………………………………………………………………………………………………………………… 45
3-5-جدا سازی سویه ها…………………………………………………………………………………………………………………………………… 45
3-6-نگهداری سویه ها……………………………………………………………………………………………………………………………………… 46
3-7-آنتی بیوگرام……………………………………………………………………………………………………………………………………………… 46
3-7-1-تهیه سوسپانسیون باکتریایی………………………………………………………………………………………………………………….. 46
3-7-2-روش آنتی بیوگرام……………………………………………………………………………………………………………………………….. 47
3-8-بررسی مقاومت افزایش یافته به جنتامایسین و استرپتومایسین……………………………………………………………………. 48
3-9-اجرای PCR……………………………………………………………………………………………………………………………………………… 48
3-9-1-آماده سازی واستخراج ژنوم………………………………………………………………………………………………………………….. 48
3-9-1-1-جوشاندن………………………………………………………………………………………………………………………………………… 49
3-10-اندازه گیری غلظت DNA ژنومیک تخلیص شده……………………………………………………………………………………. 49
3-11-الکتروفورز محصول استخراج ژنوم…………………………………………………………………………………………………………. 50
3-12-انتخاب و سنتز پرایمر…………………………………………………………………………………………………………………………….. 50
3-13-روش آماده سازی پرایمرها……………………………………………………………………………………………………………………… 51
3-13-1-محلول کاری پرایمر PCR…………………………………………………………………………………………………………………. 51
3-13-2- ترکیب واکنش PCR برای هر نمونه…………………………………………………………………………………………………. 52
3-14-انجام واکنش PCR…………………………………………………………………………………………………………………………………. 52
3-15-طریقه ساخت بافر…………………………………………………………………………………………………………………………………… 54
3-15-1-تهیه بافر(SX )TBE…………………………………………………………………………………………………………………………… 54
3-15-2-تهیه ژل Buffer Loading Gel……………………………………………………………………………………………………. 54
3-16-تهیه ژل الکتروفورز………………………………………………………………………………………………………………………………… 55
3-16-1-تهیه ی ژل آگاروز جهت انجام الکتروفورز ژنوم اسنخراج شده و محصول PCR…………………………………. 55
3-17-تعیین توالی……………………………………………………………………………………………………………………………………………. 55
فصل چهارم–نتایج و بحث
4-1-نتایج مربوط به جداسازی گونه های انتروکوکی از نمونه های بالینی………………………………………………………….. 56
4-2-نتایج حاصل از کشت انتروکوک ها بر روی محیط و رنگ آمیزی گرم……………………………………………………….. 57
4-3-نتایج حاصل از حساسیت آنتی بیوتیکی به روش دیسک دیفیوژن………………………………………………………………. 61
4-4-نتایج حاصل از استخراج…………………………………………………………………………………………………………………………… 61
4-5-نتایج PCR……………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 62
4-6-بحث………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 66
فصل پنجم–نتیجهگیری
5-1- نتیجهگیری………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 71
5-2-پیشنهادات………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 72
منابع فارسی………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 73
منابع غیرفارسی…………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 73
چکیده انگلیسی…………………………………………………………………………………………………………………………………………………… 84
فهرست جدولها
عنوان صفحه
جدول(3-1) اجزای تشکیل دهنده محیط بلاد آگار…………………………………………………………………………………………….. 43
جدول(3-2) اجزای تشکیل دهنده ی محیط BHI براث……………………………………………………………………………………… 43
جدول(3-3) اجزای تشکیل دهنده محیط مولر هینتون آگار………………………………………………………………………………… 44
جدول(3-4) اجزای تشکیل دهنده محیط پایه قند………………………………………………………………………………………………. 44
جدول(3-5) مشخصات دیسک های آنتی بیوتیکی استفاده شده………………………………………………………………………….. 48
جدول(3-6) پرایمرهای استفاده شده برای پیدا کردن به سویه های انتروکوکی مقاوم به آمینوگلیکوزیدی…………….. 50
جدول( 3-7)محلول کاری جهت پرایمر aac(6ʹ)-Ie-aph(2ʹʹ)-Ia………………………………………………………………….. 51
جدول( 3-8 )محلول کاری جهت پرایمر aph(3ʹ)-IIIa……………………………………………………………………………………. 51
جدول (3-9 )محلول کاری جهت پرایمر ant(4)-Іa………………………………………………………………………………………… 51
جدول( 3-10) محلول کاری جهت PCR…………………………………………………………………………………………………………… 52
جدول(3-11) برنامه PCR بهینه سازی شده برای جفت پرایمر aac(6ʹ)-Ie-aph(2ʹʹ)-Ia……………………………….. 53
جدول(3-12)برنامه PCR بهینه سازی شده برای جفت پرایمر aph(3ʹ)-IIIa……………………………………………………. 53
جدول(3-13) برنامه PCR بهینه سازی شده برای جفت پرایمر ant(4)-Іa……………………………………………………….. 54
جدول( 3-14) اجزای تشکیل دهنده بافر TBE………………………………………………………………………………………………….. 54
جدول(3-15) اجزای تشکیل دهنده ژل لودینگ بافر………………………………………………………………………………………….. 53
جدول( 4-1) درصد فروانی انتروکوکوس فکالیس و انتروکوکوس فاسیوم در نمونه های بالینی…………………………… 60
جدول(4-2) درصدفراوانی سویه های انتروکوک حاوی یک ژن در نمونه های بالینی…………………………………………. 64
جدول(4-3) درصدفراوانی سویه های انتروکوک حاوی بیش از یک ژن در نمونه های بالینی………………………………. 66
فهرست نمودارها
عنوان صفحه
نمودار(4-1) درصد فراوانی انتروکوک های جداسازی شده از نمونه های بالینی………………………………………………….. 57
نمودار(4-2) نتایج حاصل از روش دیسک دیفیوژن برای تمام ایزوله های انتروکوکی…………………………………………. 61
فهرست شکلها
عنوان صفحه
شکل( 4-1) کشت در محیط5/6 درصد BHI Broth Nacl……………………………………………………………………………… 57
شکل(4-2) کشت روی محیط بلاد آگار ……………………………………………………………………………………………………………. 58
فرم در حال بارگذاری ...
[چهارشنبه 1399-10-17] [ 12:32:00 ق.ظ ]
|