دانلود پایان نامه:ارزیابی اثر عصاره پلاکتی مشتق از خونبند نافبر تکثیر فیبروبلاست و فعال شدن مسیر پیام رسانی Smad |
۱-۱۹ فاکتور رشد رگ زایی.. 20
۱-۲۰ فاکتور رشد اپیدرمی.. 21
۱-۲۱ فاکتور رشد مشتق از پلاکت.. 22
۱-۲۲ فاکتور رشد تراریختی.. 24
۱-۲۳ اهداف طرح: 26
27
۲-۱ مواد، وسایل و دستگاه های موردنیاز برای آزمایش ها به شرح زیر است: 28
۲-۲ کشت و پاساژ رده سلول هایفیبروبلاستانسانی.. 30
۲-۲-۱ رده سلولی موردمطالعه. 30
۲-۲-۲ آماده سازی محیط کشت سلولی.. 30
۲-۲-۳ پاساژ سلولی.. 31
۲-۲-۴ شمارش سلولی.. 32
۲-۲-۵ انجماد و ذخیره سازی سلول ها 33
۲-۲-۶ ذوب کردن سلول های منجمد شده. 33
۲-۲-۷ تهیه فرآورده عصاره پلاکتی مشتق از خون بند ناف.. 34
۲-۳ بررسی اثر عصاره پلاکتی بر تکثیر (فیبروبلاست) 35
۲-۴ بررسی اثر فرآورده عصاره پلاکتی بر درصد بقاء سلول های فیبروبلاست.. 36
۲-۵ اندازه گیری میزان مهاجرت سلولی به روش assay Scratch. 36
۲-۶ فرمول بکار رفته در تست خراشیدگی.. 37
۲-۷ بررسی بیان ژن. 37
۲-۷-۱ مراحل استخراج RNA.. 38
۲-۷-۲ تیمار RNA با DNAaseІ. 40
۲-۷-۳ تعیین جذب نوری و غلظت نمونه های RNA.. 40
۲-۷-۴ الکتروفورز، رنگ آمیزی و مشاهده RNA بر روی ژل آگارز. 40
۲-۷-۵ سنتز cDNA.. 42
۲-۷-۶ واکنش زنجیره ای پلیمراز 43
۲-۷-7 پرایمر. 43
۲-۷-8 نحوه رقیق کردن پرایمر. 43
۲-۷-9 Real time PCR. 44
۲-۸ جمع آوری عصاره سلولی.. 46
۲-۸-۱ تعیین غلظت پروتئین ها به روش بردفورد. 46
۲-۸-۲ انجام تست وسترن بلات به منظور بررسی تغییرات سطح پروتئین های psmad2/3, smad2/3 در مسیر smad signaling 47
۲-۸-۳ مرحله الکتروفوز. 48
۲-۸-۴ مرحله ساندویچ. 48
۲-۸-۵ مرحله Blocking و افزودن آنتی بادی ها: 49
۲-۸-۶ مرحله Stripping. 50
۲-۸-۷ مرحله ظهور فیلم. 51
۲-۹ آنالیزهای آماری.. 51
.. 53
۳-۱ بررسی اثر غلظت های مختلف عصاره پلاکتی مشتق از خون بند ناف بر تکثیر سلول های فیبروبلاست.. 54
۳-۲ بررسی اثر غلظت های مختلف عصاره پلاکتی مشتق از خون بند ناف بر درصد بقاء سلول های فیبروبلاست.. 56
۳-۳ نتایج حاصل از بررسی اثر غلظت های مختلف عصاره پلاکتی مشتق از خون بند ناف بر مهاجرت سلول های فیبروبلاست 57
۳-۴ نتایج حاصل از بررسی اثر غلظت های مختلف لایزت پلاکتی مشتق از خون بند ناف بر بیان ژن های Smad2 و Smad3 درسلول های فیبروبلاست تیمار شده. 62
۳-۴-۱ کیفیت RNA استخراج شده. 62
۳-۵ بررسی میزان بیان پروتئین های Smad2- P Smad3 Smad3 P Smad2 توسط وسترن بلات.. 68
.. 72
4-1 بحث.. 73
4-2 نتیجه گیری.. 79
۴-3 پیشنهاد ها 80
. 81
منابع انگلیسی.. 82
فهرست جداول
جدول 1- 1: لیست کامل از فاکتورهای رشد در پلاکت (22) 9
جدول 1- 2: لیستی از محتویات α گرانول های پلاکتی (۲۲) 11
جدول 2- 1: تجهیزات مورداستفاده. 28
جدول 2- 2: مواد مصرفی جهت آزمایشات سلولی.. 29
جدول 2- 3: مواد و وسایل موردنیاز برای بررسی بیان ژن. 29
جدول 2- 4: مواد و وسایل موردنیاز برای تکنیک وسترن بلات.. 30
جدول 2- 5: توالی پرایمر. 43
فهرست اشکال
شکل 1- 1: مرحله التهاب در فرایند ترمیم زخم (۱۴) 5
شکل1- 2: مرحله شکل گیری بافت در فرایند ترمیم زخم (14) 6
شکل 1- 3: اتصالات دو پلاکت در ایجاد لخته پلاکتی (22) 10
شکل 1- 4: ارتباط مسیر سیگنالینگ smad2/3 با فرایند ترمیم زخم. 26
شکل 2- 1: کشت سلول در پلیت ۶ خانه. 36
شکل 2- 2: نحوه کشیدن خراش در تکنیک assay Scratch. 37
شکل 2- 3: ۳ فاز تشکیل شده در استخراج RNA.. 38
شکل 2- 4: نمای کلی از استخراج RNA.. 39
شکل 2- 5: RNA استخراج شده بر روی ژل اگاروز. 41
شکل 2- 6: ساختار شیمیایی سایبر گرین.. 44
شکل 2- 7: مکانیسم عمل سایبر گرین.. 45
شکل 2- 8: مرحله تهیه ساندویچ. 49
شکل 2- 9: مرحله Blocking و افزودن آنتی بادی ها 50
شکل 3- 1: بررسی افزایش تکثیر در غلظت های متفاوت عصاره پلاکتی مشتق از خون بند ناف در مقایسه با گروه های کنترل در ۲۴ ساعت 55
. 55
شکل 3- 3: نمودار مربوط به تأثیر غلظت های متفاوت UCB-PL بر درصد بقا فیبروبلاست در این شکل علامت* به معنی تفاوت معنی دار گروه با غلظت ۱۰% در مقایسه با همه گروه های دیگر به جز گروه POS و ۱۵%-۸% است. 57
. 58
شکل 3- 5: سنجش اثر UCB-PL ۸% بر میزان مهاجرت سلولی در سلول های فیبروبلاست به روش scratching در ۴ زمان ۰-۶-۱۲-۲۴ ساعت بعد از خراش… 58
شکل 3- 6: سنجش اثر UCB-PL ۱۰% بر میزان مهاجرت سلولی در سلول های فیبروبلاست به روش scratching در ۴ زمان ۰-۶-۱۲-۲۴ ساعت بعد از خراش… 59
شکل 3- 7: سنجش اثر UCB-PL/FBS بر میزان مهاجرت سلولی در سلول های فیبروبلاست به روش scratching در ۴ زمان ۰-۶-۱۲-۲۴ ساعت بعد از خراش… 60
شکل 3- 8: سنجش اثر FBS۱۰% بر میزان مهاجرت سلولی در سلول های فیبروبلاست به روش scratching در ۴ زمان ۰-۶-۱۲-۲۴ ساعت بعد از خراش… 61
شکل 3- 9: سنجش اثر گروه کنترل منفی بر میزان مهاجرت سلولی در سلول های فیبروبلاست به روش scratching در ۴ زمان ۰-۶-۱۲-۲۴ ساعت بعد از خراش… 62
شکل 3- 10: کیفیت RNA استخراج شده در گروه های مختلف.. 63
شکل 3- 11: نمودار Melt Curve حاصل از Real-time PCR در فیبروبلاست های تیمار شده با دزهای مختلف از UCB-PL و بررسی بیان ژن GAPDH.. 64
شکل 3- 12: نمودار Amplification Plot حاصل از Real-time PCR در فیبروبلاست های تیمار شده با دزهای مختلف از UCB-PL و بررسی بیان ژن GAPDH.. 64
شکل 3- 13: نمودار Melt Curve حاصل از Real-time PCR در فیبروبلاست های تیمار شده با غلظت های مختلف از UCB-PL و بررسی بیان ژن smad۲. 65
شکل 3- 14: نمودار Amplification Plot حاصل از Real-time PCR در فیبروبلاست های تیمار شده با غلظت های مختلف از UCB-PL و بررسی بیان ژن smad2. 65
شکل 3- 15: نمودار Melt Curve حاصل از Real-time PCR در فیبروبلاست های تیمار شده با غلظت های مختلف از UCB-PL و بررسی بیان ژن smad2. 66
شکل 3- 16: نمودار Melt Curve حاصل از Real-time PCR در فیبروبلاست های تیمار شده با دزهای مختلف از UCB-PL و بررسی بیان ژن smad3. 66
شکل 3- 17: مطالعه اثر گروهای مختلف UCB-PL بر میزان بیان Smad2 در سلول های فیبروبلاست تیمار شده به روش Real time-PCR 67
شکل 3- 18: مطالعه اثر گروهای مختلف UCB-PL بر میزان بیان Smad3 در سلول های فیبروبلاست تیمار شده به روش Real time-PCR 68
شکل 3- 19: رنگ آمیزی ژل حاوی پروتئین ها 69
شکل 3- 20: وسترن بلات برای پروتئین Smad2. 70
شکل 3- 21: وسترن بلات برای پروتئین P Smad2. 70
شکل 3- 22: وسترن بلات برای پروتئین Smad3. 70
شکل 3- 23: وسترن بلات برای پروتئین p-Smad3. 71
چکیده
هدف:
فرم در حال بارگذاری ...
[چهارشنبه 1399-10-17] [ 01:01:00 ق.ظ ]
|