4

1-2 میکرو ارگانیسم های تولید کننده

6

1-3 مکانیسم تنظیم کننده ترشح آنزیم آسپاراژیناز

10

1-4 کلاس های عمومی از ال-آسپاراژیناز

11

1-5 روش تعیین سختی و ساختار ال-آسپاراژیناز

12

1-6 ویژگی های ساختاری ال-آسپاراژیناز

12

1-6-1ساختار مونومری آنزیم ال-آسپاراژیناز

12

1-6-1-1 شرح جایگاه فعال ال-آسپاراژیناز

14

1-6-2 ساختار تترامر آنزیم ال-آسپاراژیناز

15

1-6-3 ساختار اُکتامر آنزیم ال-آسپاراژیناز

17

1-7 انواع آنزیم ال-آسپاراژیناز برحسب منشأ جداسازی

18

1-7-1-آنزیم های بومی

18

1-7-1-1 ال-آسپاراژینازی از اشرشیا کلی

18

1-7-1-2 ال-آسپاراژینازی از اروینیا

19

1-7-2 آنزیم اصلاح شدهPEG) -آسپاراژیناز)

20

1-8 کاربرد ال – آسپاراژینازها

22

1-8- 1 مکانیسم عمل به عنوان یک کمک کننده به فرآوری مواد غذایی

23

1-8-2 مکانیسم عمل به عنوان یک دارو

25

1-9 علم شیمی و فارماکولوژی برای دارو

26

1-10 نیمه عمر دارو

26

1-11 مسائل و رویکردهای مرتبط با استفاده درمانی از ال-آسپاراژیناز

27

1-11-1 عوارض ایمونولوژیک

27

1-11-2 مقاومت در برابر آسپاراژیناز

27

1-11-3 سمیت دارو

28

1-12 فارموکینیتیک

29

فصل دوم : مروری بر تحقیقات انجام شده

2_1 تحقیقات انجام شده در ایران و خارج از ایران

32

2-1-1 تحقیقات انجام شده بر روی باکتری های خاکزی مولد آنزیم ال-آسپاراژیناز

32

2-1-2 تحقیقات انجام شده بر روی آنزیم ال-آسپاراژیناز به منظور بهینه سازی

34

2-1-3 تحقیقات انجام شده بر روی آنزیم ال-آسپاراژیناز با استفاده از محیط کشت اختصاصیM₉

37

2-1-4 تحقیقات انجام شد بر روی آنزیم ال-آسپاراژیناز با استفاده از روش نسلریزاسیون

38

2-1-5 تحقیقات انجام شده بر روی باکتری های مولد آنزیم ال-آسپاراژیناز جدا شده ار آب و رسوبات

39

2-1-6 تحقیقات انجام شده بر روی آنزیم ال-آسپاراژیناز بر اساس روش SDS-PAGE

39

فصل سوم: مواد و روش ها

3-1 غربالگری سویه های مولد آنزیم از خاک

42

3-2 جداسازی و کشت باکتری

42

3-2-1 مواد و وسایل لازم جهت جداسازی و کشت باکتری از خاک

42

3-2-2 کشت

43

3-3 فعالیت آنزیم

45

3-4 روش های اندازه گیری آمونیاك

45

3-5 مواد و وسایل لازم بررسی فعالیت آنزیم

45

3-6 معرف آزمایش

46

3-7 خواندن جذب لوله هایTestوBlank

46

3-8 مراحل کلونینگ

47

3-9 شرح مراحل کلونینگ

48

فصل چهارم: نتایج

4-1 نتایج مربوط به جداسازی

60

4-1-1 نتایج کشت

60

4-1-2 نتایج رنگ آمیزی گرم و تست های بیوشیمیایی

61

4-1-3 نتایج بررسی فعالیت آنزیمی

63

4-1-4 نتیجه آنالیز کیفی قطعه تکثیر یافته

66

4-1-5 نتایج مربوط به مستعد سازی

66

4-1-6 نتایج مربوط به کشت ماتریکس

66

4-1-7 نتایج تستQuick- check

67

4-1-8 نتایج استخراج پلازمید

68

4-1-9 نتایجPCRتاییدی

69

4-1-10نتایج تعیین توالی نمونه:Bacillus cereus strain

69

4-1-11نتایج تعیین توالی نمونه:Bacillus thuringiensis strain

74

4-1-12 نتایج تعیین توالی نمونه :Oerskovia turbata

79

فصل 5 نتایج

5-1 نتیجه

83

5-2 جمع بندی

83

5-3 محدودیت ها

83

5-4 پیشنهادها

84

منابع

85

فهرست جداول

جدول ‏1-1 تعدادی از میکروارگانیسم های تولیدکننده آسپاراژیناز	7
جدول1-2 منابع میکروبی ال-آسپاراژیناز و خواص آن	8
جدول1-3 مشخصات ال-آسپاراژیناز نشان دهنده فعالیت گلوتامیناز	19
جدول1-4 خواص آنزیم های اشرشیا کلی و اروینیا و برخی از فرآورده های بومی و اصلاح شده	20
جدول1-5 مقایسه ای از سمیت ال-آسپاراژیناز بومی وPEG	29
جدول1-6. خواص برخی از ال-آسپاراژینازهای میکروبی	31
جدول 3-1 مواد لازم جهت ساخت محیط کشت	42
جدول 3-2 مقادیر مورد نیاز برای تهییه میکسPCRبا در نظر گرفتن+n	51
جدول 3-3 شرایط دمایی و زمانی مورد نیاز برای میکروتیوپ ها	51
جدول 3-4 مقادیر اضافه شده به داخل میکروتیوپ0/2cc	54
جدول 3-5 : میزان مواد اضافه شده به داخل میکروتیوپ در مرحله یQuick-check	57
جدول4-1 قطر هاله تشکیل شده توسط سویه ها روی محیط برحسب میلی متر	61
جدول4-2 رنگ آمیزی گرم نمونه های آنزیم مثبت	62
جدول4-3 نتایج مربوط به آزمودن های بیوشیمیایی نمونه های آنزیم مثبت	63
جدول4-4 جذب نمونه های مولد آنزیم در طول موج 600 نانومتر	64
جدول4-5 جذب نمونه های مولد آنزیم در طول موج 480 نانومتر	72
جدول4-6 نتایج در سطح جنس و گونه	80

فهرست نمودار ها

نمودار 1-1 طبقه بندی عمومی ازآسپاراژیناز	11
نمودار 4 – 1 میزان جذب نمونه های مولد آنزیم ال آسپاراژیناز در 600 تاتومتر	64
نمودار 4- 2 میزان جذب نمونه های مولد آنزیم ال آسپاراژیناز در 480 تاتومتر	65

فهرست شکل ها