موضعی……………………………………………………………………………………………………………………………………………..13

1-7-2 درمان سیستماتیک………………………………………………………………………………………………………………………………………..13

1-7-3 کولونوسکپی………………………………………………………………………………………………………………………………………………13

• لاپاراسکپی………………………………………………………………………………………………………………………………………………13

1-7-6جراحی باز……………………………………………………………………………………………………………………………………………………13

1-7-7 شیمی درمانی……………………………………………………………………………………………………………………………………………..14

1-7-8درمان بیولوژیکی………………………………………………………………………………………………………………………………………….14

1-7-9 پرتو درمانی………………………………………………………………………………………………………………………………………………..14

1-7-9-1 انواع درمان با اشعه………………………………………………………………………………………………………………………………….14

1-8 ALCAM……………………………………………………………………………………………………………………………………………………15

1-9ویژگی های عمومیALCAM………………………………………………………………………………………………………………………….15

1-10شناساییALCAM به عنوان یک هدف با انکولوژی………………………………………………………………………………………..16

مساله تحقیق………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….19

فصل دوم:مروری بر تحقیقات انجام شده

2-1 نقش ALCAM در درمان سرطان………………………………………………………………………………………………………………….20

فصل سوم: مواد و روش ها

3-1 مواد مورد استفاده……………………………………………………………………………………………………………………………………………23

3-1-1 باکتری مورد استفاده …………………………………………………………………………………………………………………………………..23

3-1-2 پلاسمید ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………23

3-1-3 انزیم ها …………………………………………………………………………………………………………………………………………………….23

3-1-4 کیت های ازمایشگاهی. ………………………………………………………………………………………………………………………………24

3-1-5 انتی بیوتیک ها. ………………………………………………………………………………………………………………………………………….24

3-1-6 محیط کشت باکتری …………………………………………………………………………………………………………………………………..25

3-1-7 ژل الکتروفورز……………………………………………………………………………………………………………………………………………25

3-1-8 مواد شیمیایی. …………………………………………………………………………………………………………………………………………….25

3-1-9 وسایل و تجهیزات آزمایشگاهی …………………………………………………………………………………………………………………..25

3-2 انالیز بیوانفورماتیکی ناحیه C2 پروتئین ALCAM. ………………………………………………………………………………………….29

3-2-1 استخراج توالی ناحیه C2 پروتئیین ALCAM ………………………………………………………………………………………………29

3-2-2 بهینه سازی توالی یا Optimization …………………………………………………………………………………………………………29

3-3 سنتز شیمیایی DNA ناحیهC2 پروتئین ALCAM ……………………………………………………………………………………………….29

3-3-1 سنتز شیمیایی ژن نوترکیب ……………………………………………………………………………………………………………………………..29

3-3-2 پایداری و شرایط نگهداری DNA سنتز شده ……………………………………………………………………………………………………..30

3-3-3 محلول سازی DNA لیوفیلیزه………………………………………………………………………………………………………………………….30

3-4 کلونینگ پلاسمید- AMP⁺pBSK حاوی DNA ناحیهC2 پروتئینALCAM ………………………………………………30

3-4-1 آماده سازی باکتری شایسته…………………………………………………………………………………………………………………………..30

3-4-1-1 مواد و محلول ها…………………………………………………………………………………………………………………………………….30

3-4-1-2 روش کار………………………………………………………………………………………………………………………………………………30

3-4-2 ترانسفورماسیون پلاسمید به سلول های مستعد TOP10 E.coli.. ………………………………………………………………..31

3-4-2-1 روش کار……………………………………………………………………………………………………………………………………………..31

3-4-3 ارزیابی کلونی ها………………………………………………………………………………………………………………………………………..32

3-4-4 استخراج پلاسمید – AMP⁺pBSK حاوی DNA ناحیه C2……………………………………………………………………..33

3-4-5 تایید آنزیمی پلاسمید استخراج شده……………………………………………………………………………………………………………..35

3-4-5-1 هضم آنزیمی دوگانه یا Double digestion…………………………………………………………………………………………..35

3-4-5-2 الکتروفورز…………………………………………………………………………………………………………………………………………….35

3-5 ساب کلونینگ ژن ناحیهC2 پروتئین ALCAM……………………………………………………………………………………………….37

3-5-1 تخلیص DNA ناحیهC2 از ژل………………………………………………………………………………………………………………….37

3-5-2 لایگیشن…………………………………………………………………………………………………………………………………………………….38

3-5-3 ترانسفورماسیون………………………………………………………………………………………………………………………………………….39

3-5-3-1 آماده سازی سلول های شایسته…………………………………………………………………………………………………………………39

3-5-3-2 ترانسفورماسیون سلول های شایسته E.coli BL21(DE3) با محصول لایگیشن…………………………………………40

3-5-4 ارزیابی کلونی ها………………………………………………………………………………………………………………………………………..40

3-5-5 استخراج پلاسمید بیانی pet-28a حاوی ژن ناحیهC2 پروتئین ALCAM……………………………………………………..41

3-5-6 تایید آنزیمی پلاسمید استخراج شده……………………………………………………………………………………………………………..42

3-6 بیان پروتئین مولتی توپ EpCAM………………………………………………………………………………………………………………..43

3-6-1 القاء بیان پروتئین………………………………………………………………………………………………………………………………………..43

3-6-2 بررسی بیان به کمک تکنیک SDS-page…………………………………………………………………………………………………….43

3-6-2-1 روش ساخت محلول ها و ژل ها……………………………………………………………………………………………………………..44

3-6-2-2 Run کردن نمونه ها……………………………………………………………………………………………………………………………..45

3-6-2-3 رنگ آمیزی با کوماسی G-250 کلوئیدی………………………………………………………………………………………………….45

فصل چهارم:نتایج

4-1 نتایج حاصل از بهینه سازی توالی ………………………………………………………………………………………………………………………….47

C2ناحیهDNA4-2 سنتز شیمیایی………………………………………………………………………………………………….50

4-3کلونینگ پلاسمید AMP+ -pBSK حاویDNA ناحیهC2…………………………………………………………………………………….52

4-4 ساب کلونینگ ژن ناحیه C2……………………………………………………………………………………………………………………………….54

4-5بیان پروتئینC2 و تایید آن به کمک تکنیک SDS_page…………………………………………………………………………………………..57

فصل پنجم:

بحث…………………………………………………………………………………………………………………………59

نتیجه گیری………………………………………………………………………………………………………………………………..69

منابع…………………………………………………………………………………………………………………………………………71

چکیده انگلیسی………………………………………………………………………………………………………………………………..74

فهرست شکل ها:

شکل 1-1 تصویر بخش های مختلف روده بزرگ………………………………………………………………………………………………………5

شکل1-2 نمای کلی روده بزرگ، روده کوچک و معده……………………………………………………………………………………………….6

شکل1-3 درصد فراوانی محل آناتومیک سرطان کولورکتال ………………………………………………………………………………………..7

شکل1-4 درصد فراوانی مراحل سرطان کولورکتال…………………………………………………………………………………………………..12

شکل1-5 نقشه ژنتیکی پروتئین ALCAM…………………………………………………………………………………………………………….15

شکل1-6 رنگ آمیزی ایمنوهیستوشیمیایی ALCAM در بافت توموری…………………………………………………………………….17

شکل3-1 نقشه ژنی پلاسمید Pet28a…………………………………………………………………………………………………………………….24

شکل3-2 دستگاه انکوباتور……………………………………………………………………………………………………………………………………25

شکل3-3 دستگاه اتوکلاو………………………………………………………………………………………………………………………………………26

شکل3-4 دستگاه مولد ولتاژو تانک الکتروفورز………………………………………………………………………………………………………..26

شکل3-5 شیکر انکی باتور…………………………………………………………………………………………………………………………………….27

شکل3-6 سانتریفیوژ……………………………………………………………………………………………………………………………………………..27

شکل3-7 دستگاه تصویر ساز ژل……………………………………………………………………………………………………………………………27

شکل3-8 ترموسایکلر……………………………………………………………………………………………………………………………………………28

شکل3-9 بن ماری ………………………………………………………………………………………………………………………………………………28

شکل3-10 کیت استخراج پلاسمید…………………………………………………………………………………………………………………………33

شکل3-11 کیت استخراج DNA از ژل فرمانتاز………………………………………………………………………………………………………37

شکل4-1 شاخص سازی کدون. سمت راست: قبل از بهینه سازی سمت چپ: بعد از بهینه سازی…………………………………..48

شکل4-2 میزان فراوانی کدون های بهینه. سمت چپ: قبل از بهینه سازی سمت راست:بعد از بهینه سازی ……………………..48

شکل4-3 شاخص سازی محتوای G-C سمت راست:قبل از بهینه سازی سمت چپ: بعد از بهینه سازی………………………..49

شکل4-4ترادف ناحیهC2 مورد نظر پس از بهینه سازی کدون های مربوطه جهت بیان در میزبان E.coli………………………49

شکل4-5 مقایسه نوکلئوتید بصورت نظیر به نظیر در توالی های اولیه و بهینه سازی شده……………………………………………….50

شکل4-6 تائید اندازه ژن سنتز شده به کمک هضم آنزیمی…………………………………………………………………………………………51

شکل4-7 نقشه ژنی پلاسمید حاوی DNA ناحیه C2 پروتئینALCAM…………………………………………………………………53

شکل4-8 تائید حضور پلاسمید حاوی ژن ناحیه C2 در محصول استخراج پلاسمید…………………………………………………….53

شکل4-9 هضم دوگانه آنزیمی پلاسمید تکثیر یافتهPBSK……………………………………………………………………………………….54

شکل4-10 نقشه ژنی پلاسمید Pet28a………………………………………………………………………………………………………………….55

شکل4-11 باکتری های BL21(DE3) ترانسفورم شده با Pet28a حاوی ژن ناحیه C2…………………………………………….55

شکل4-12 تائید حضور پلاسمید Pet28a حاوی ژن ناحیه C2 در باکتری ترانسفورم شده BL21(DE3) ………………….56

شکل4-13 نتیجه حاصلهاز هضم آنزیمی دوگانه پلاسمید Pet28a حاوی ژن ناحیه C2………………………………………………57

شکل4-14 بررسی بیان پروتئین ناحیه C2 به کمک تکنیک SDS-Page………………………………………………………….58

چکیده:

همة سرطان ها از سلول ها شروع می شوند به طور طبیعی ، سلول ها به گونه ای که بدن به آنها نیاز دارد، رشد می كنند و تقسیم می شوند. سلول های جدید زمانی كه لزومی به وجود آنها نیست، به وجود می آیند و یا سلول های پیر در زمان مرگ به حیات خود ادامه می دهند. این سلول های اضافی توده بافتی به نام تومور تشکیل می دهند.

سرطان کولورکتال یکی از شایع ترین سرطان های بدخیم در سرتاسر جهان می باشد که میزان ابتلا به آن حدود 6/0 می باشد که منجر به مرگ600 هزار نفر در سال می گردد. .CD166 به عنوان مارکر سلول های بنیادی سرطان کولورکتال شناسایی و معرفی شده است.که با توجه به بیان آن بر سطح سلول های سرطان کولورکتال در مراحل مختلف بیماری می توان از آن جهت کارهای درمانی و تشخیصی استفاده نمود.

ALCAM مارکر تشخیصی مثبتی برای بقای کلی بیماران مبتلا به سرطان کولورکتال می باشد و شناسایی آن ممکن است به بهینه سازی سیتسم مرحله بندی تشخیصی موجود کمک کند.ALCAMمعمولا در سرطان کولورکتال روشن بوده و مارکر تشخیصی مستقل جدیدی می باشد که بر اهمیت ان در پیشروی تومور در سرطان کولورکتال تاکید شده است.

در این مطالعه ما ابتدا سعی بر آن داشتیم توالی مورد نظر را از بانک های اطلاعاتی ژنی استخراج نماییم و سپس از طریق آنالیز بیوانفورماتیکی توالی مورد نظر را از نظر بهترین بیان در میزبان باکتریایی آماده نماییم.ژن مورد نظر از طریق شیمیایی سنتز شده و سپس با استفاده از فرایند کلونینگ، قطعه ژنی سنتز شده را به کمک پلاسمید بیانی pet-28a درون سیستمپروکاریوتیانتقال داده و تکثیرنموده. در انتها نیز بیان ناحی C2در باکتری های نوترکیب با القاگر مناسب القا می نماییم و وجود پروتئین مورد نظر را به کمک تکنیک SDS-page مورد بررسی قرار می دهیم.

ناحیه C2 می تواند به مانند پروتئین اصلی خاصیت ایمنی زائی داشته باشد. این قطعه ژنی توانایی کلون شدن در میزبان پروکاریوتی را دارا بوده و باکتری قادر است به کمک القاگر مناسب به میزان فراوانی پروتئین مورد نظر را تولید کند. از این جهت می توان از این پروتئین نوترکیب برای تهیه کیت تشخیصی سرطان کولورکتال به واسطه تکنیک الایزا استفاده برد. همچنین می توان با تزریق این پروتئین نوترکیب به عنوان واکسن، سیستم ایمنی فرد را جهت پیش گیری از ابتلا به سرطان تقویت نمود.

واژه های کلیدی:

سرطان کولورکتال، ALCAM، ناحیه C2 پروتئینALCAM ،کلونینگ

فصلاول

مقدمه

1-1سرطان چیست

اصطلاح سرطان به تومورهای اطلاق می شود که می توانند به بافت های مجاور خود که از سلول­های سالم تشکیل میشوند حمله کنند توانایی مجاورت و هجوم سلول های توموری عامل طبقه بندی تومورها به دو دسته خوش خیم و بدخیم است اگر یک تومور بدخیم به یک رگ خونی یا لنفی[1] برسد می تواند متاستاز [2]دهد ودر بافت های دیگری رشد کند. نئوپلاسم(که معنی آن رشد جدید است) شکل غیر طبیعی رشد سلول­ها است و تومور، نئپلاسمی است که با وضعیت بیمار گونه همراه است، تومور ها بیماری هایی هستند که در آنها جمعیتی از سلول های، که به لحاظ ژنتیکی هم خانواده هستند توانایی رشد نا به هنجار را کسب می کنند(نخعی سیستانی وهمکاران 1389). همة سرطان ها از سلول ها شروع می شوند كه واحد سازنده بدن و اساس زندگی محسوب می شوند. سلول ها بافت را می سازند و بافت های بدن، اندام ها را تشكیل می دهند. به طور طبیعی ، سلول ها به گونه ای که بدن به آنها نیاز دارد، رشد می كنند و تقسیم می شوند. سلول های پیر می میرند وسلول های جدید جای آنها را می گیرند.

گاهی نظم مراحل رشد به هم می خورد. سلول های جدید زمانی كه لزومی به وجود آنها نیست، به وجود می آیند و یا سلول های پیر در زمان مرگ به حیات خود ادامه می دهند. این سلول های اضافی توده بافتی به نام تومور تشکیل می دهند.

تومورها خوش خیم یا بد خیم می باشند.

تومورهای خوش خیم سرطانی نیستند.

• این نوع تومورها به ندرت زندگی فرد را تهدید می کنند.

• بیشتر تومورهای خوش خیم قابل جراحی بوده و معمولا عود نمی کنند.

• تومورهای خوش خیم، به بافت های اطراف و سایر قسمت های بدن گسترش نمی یابند.

تومورهای بدخیمسرطانی هستند.

• عموما این تومورها بسیار خطرناك تر از تومورهای خوش خیم بوده و زندگی فرد را تهدید می کنند.

• تومورهای بدخیم قابل جراحی بوده ولی در مواردی بعد از عمل جراحی مجددا عود می كنند.

2- 4- نشانگرهای ژنتیکی.. 42

2- 5- نشانگرهای مورفولوژیکی.. 42

2- 6- نشانگرهای مولکولی.. 43

2- 7- نشانگرهای پروتئینی یا بیوشیمیایی.. 44

2- 8- نشانگرهای DNA.. 45

2- 8- 1- نشانگرهای DNA غیر مبتنی بر PCR.. 46

2- 8- 2- نشانگرهای مبتنی بر PCR.. 46

2- 9- نشانگرهای غیر اختصاصی.. 47

2- 9- 1- RAPD.. 47

2- 10- نشانگرهای اختصاصی.. 48

2- 10- 1- AFLP. 48

2- 10- 2- SSR.. 48

2- 10- 3- RFLP-PCR.. 50

2- 10- 4- RFLP Based PCR با اتصال ناقص… 51

فصل سوم مواد، تجهیزات و روش تحقیق.. 52

3- 1- استخراج کوتین.. 55

3- 2- نمونه برداری.. 55

3- 3- غربالگری و جداسازی گونه­های تولیدکننده آنزیم کوتیناز 55

3- 4- تهیه slant از سویه­های جدا شده 57

3- 5- نگهداری طولانی مدت سویه­ها 57

3- 6- تهیه گلیسرول. 58

3- 7- تهیه محیط کشتLB.. 58

3- 8- Assay آنزیمی.. 58

3- 9- Assay ویژه آنزیمی.. 60

3- 10- استخراج DNA.. 60

3- 10- 1- استخراج DNA به روش جوشاندن. 60

3- 10- 2- استخراج DNA به رو ش CTAB.. 61

3- 10- 3- روش استخراج DNA با کیت.. 64

3- 11- اندازه­گیری کیفیت و غلظت DNA.. 65

3- 12- رنگ آمیزی با اتیدیوم برماید. 69

3- 13- واكنش زنجیره ای پلیمراز Polymerase Chain Reaction. 70

3- 14- راه اندازی واکنش PCR.. 74

3- 15- برنامهPCRبرای نشانگرRAPD.. 76

3- 16- توالی­یابی سویه­های تولیدکننده آنزیم کوتیناز با استفاده از 16S rDNA.. 77

3- 17- الکتروفورز محصولات واکنش PCR.. 78

فصل چهارم. 80

4- 1- بررسی میزان کوتین در میوه­های مختلف.. 81

4- 2- جداسازی سویه­ها 87

4- 3- بررسی فعالیت آنزیم کوتیناز در نمونه­ها 87

4- 4- نتایج بررسی کیفیت DNA بعد از استخراج. 88

4- 5- تجزیه و تحلیل تنوع ژنتیکی 6 سویه بر اساس نشانگر مولکولی RAPD.. 89

4- 6- نتایج حاصل از تجزیه خوشه­ای بر اساس نشانگر RAPD.. 89

4- 7- تجزیه به مختصات اصلی.. 90

4- 8- نتایج تجزیه باندهای حاصل از 8 پرایمر RAPD.. 92

4- 9- ضریب همبستگی کوفنتیک… 93

4- 10- شناسایی و توالی یابی سویه­ها با استفاده از 16S rDNA.. 93

فصل پنجم. 95

5- 1- استخراج کوتین.. 96

5- 2- سنجش فعالیت آنزیمی کوتیناز 97

5- 3- استخراج DNA.. 98

5- 4- تنوع ژنتیکی با استفاده از نشانگر RAPD.. 98

پیشنهادات.. 100

6- 1- پیشنهادات.. 101

فهرست جدول ها

جدول ‏2‑1 مطالعه ساختار- عملکرد کوتیناز به کمک تکنی­کهای مختلف… 24

جدول ‏2‑2 فعالیت هیدرولازی کوتیناز نسبت به تنوع گستردهای از سوبستراها 29

جدول ‏2‑3 روش­های آماده­سازی کوتیناز 30

جدول ‏3‑1 مواد مورد استفاده در پایان­نامه. 53

جدول ‏3‑2 مشخصات کامل مواد شیمیایی مورد نیاز در عملیات استخراج DNA… 61

جدول ‏3‑3 مواد مورد استفاده برای تهیه بافر TBE(10X) 68

جدول ‏3‑4 مشخصات پرایمرهای RAPD… 73

جدول ‏3‑5 مواد مورد نیاز PCR.. 75

جدول ‏3‑6 مواد مورد نیاز PCR با مستر میکس اماده 76

جدول ‏3‑7 برنامه واکنش PCR مورد استفاده برای نشانگر RAPD… 76

جدول ‏3‑8 برنامه واکنش PCR برای پرایمرهای 16S rDNA.. 77

جدول ‏3‑9 مواد مورد نیاز برای انجام PCR 6 نمونه با پرایمرهای16S rDNA.. 78

جدول‏3‑10 16S rDNA primer. 78

جدول ‏4‑1بررسی میزان کوتین.. 82

جدول ‏4‑2 بررسی میزان کوتین در خیارسبز. 83

جدول ‏4‑3 بررسی میزان کوتین در سیب زرد. 84

جدول ‏4‑4 بررسی میزان کوتین در سیب قرمز. 85

جدول ‏4‑5 تجزیه واریانس وزن کوتین نهایی بین میوه­ها 85

جدول‏4‑6 مقایسه میانگین میوه­ها به روش دانکن در سطح احتمال 1% برای صفت وزن کوتین نهایی.. 86

جدول ‏4‑7 فعالیت کوتینازی 6 نمونه. 88

جدول ‏4‑8 نتایج پرایمرهای RAPD حاصل از الکتروفورز افقی نمونه­ها 89

فهرست شکل ها

شکل ‏2‑1 ترسیم نمای ساختمان پوستک گیاه A) مرحله گستردگی کامل برگ B) تصویری با میکروسکوپ الکترونی از پوستک برگ بزرگنمایی 51000 برابر. 9

‏2‑2 مولکول کوتین و مونومرهایی که از هیدرولیز آن بدست می آید. 10

شکل ‏2‑3 نمایش شماتیکی از کوتیکول.. 11

شکل ‏2‑4 a) ساختمان غیر مشخص و بینظم کوتیکول با میکروسکوپ الکترونی b) برآمدگی­های کوتین میوه گوجه­فرنگی با میکروسکوپ الکترونی.. 11

شکل ‏2‑5 a) توالی پروتئینی آنزیم کوتیناز b) مکانیسم عمل آنزیم کوتیناز 16

شکل ‏2‑6 هیدرولاز آلفا و بتا 20

شکل ‏2‑7 ساختار کوتیناز 21

شکل ‏2‑8 توانایی تجزیه (a) و سنتز(b) ترکیبات پلی استری توسط آنزیم کوتیناز 28

شکل‏2‑9 مکانیسم عمل کوتیناز 40

‏2‑10 گسترهی مقاومت آنزیم کوتیناز در برابر دما وpH 41

شکل ‏2‑11نمودار دما و pH… 41

شکل ‏2‑12 دسته­بندی نشانگرهای ژنتیکی.. 44

شکل ‏3‑1 تهیه ژل آگارز 68

شکل ‏4‑1مراحل مختلف استخراج کوتین در گوجه­فرنگی.. 81

شکل ‏4‑2 مراحل مختلف استخراج کوتین در خیارسبز. 82

1-2-2مشخصات بنزین 9

1-3منشا گوگرد 16

1-3-1هیدروژن سولفید 18

1-3-2تیول ها 18

1-3-3سولفید ها 18

1-3-4 دی سولفید ها 18

1-3-5تیوفن و مشقاتش 19

1-4مضرات گوگرد و دلایل حذف آن 19

1-5شباهت گوگرد زدایی با نیتروژن زدایی 20

1-6روش های گوگرد زدایی 2

1-6-1گوگرد زدایی باکتریولوژی 21

1-6-2گوگرد زدایی با فلزات و ترکیبات فلزی 21

1-6-3گوگرد زدایی با روش شیمیایی 22

1-6-4گوگرد زدایی به روش اکسیداسیون 22

1-6-5گوگرد زدایی زیستی 22

1-6-6گوگرد زدایی هیدروژنی 22

1-7روش های ملایم کردن 23

1-8واحد تهیه گوگرد در پالایشگاه 24

فصل دوم :کاتالیست 26

2-1تکنولوژی هایکاتالیستیدر صنایع جدید 27

2-1-1چشم انداز آینده 27

2-2کاتالیست 30

2-2-1غیر فعال شدن کاتالیست ها 31

2-2-2واکنش های کاتالیزوری جامد 31

2-2-3مشخصات اصلی کاتالیست ها 32

2-3کاتالیست های فرآیند تصفیه هیدروژنی 32

2-4سنتز سولفید مولیبدن 33

2-5سولفیداسیون اکسیدها 34

2-6پیشینه تحقیق 34

2-6-1فرآیند OATS 34

2-6-1-1نخستین گام ها 35

2-6-1-2بازار پر رقابت 36

2-6-2فرآیند MEROX 36

2-6-2-1بهینه کردن پارامترهای عملیاتی برج مراکس 39

2-6-3فرآیند کلاوس 39

فصل سوم:آزمایشات 40

3-1طراحی آزمایش 41

3-2ساخت کاتالیست 42

3-3راکتور بستر ثابت 43

3-4مراحل انجام آزمایش 44

فصل چهارم:بهینه سازی 50

4-1بهینه سازی و نتایج 51

4-1-1فشار جزئی هیدروژن 52

4-1-2دمای واکنش 52

4-1-3سرعت فضایی 53

4-1-4نسبت هیدروژن به خوراک 53

4-2بهینه سازی پارامترهای ساختاری 53

4-3بهینه سازی شرایط عملیاتی 60

4-3-1بهینه سازی فشار 60

4-3-2بهینه سازی دما 63

4-4سینتیک 64

4-5مدل سینتیکی واکنش های هتروژن 64

4-6مدل سینتیکی پیشنهادی 66

4-7بررسی مدل های سینتیکی واکنش گوگرد زدایی هیدروژنی 66

4-9نتایج آزمایش های راکتور انتگرالی 69

4-10بدست آوردن پارامترهای سینتیکی مدل 71

فصل پنجم:نتیجه گیری و پیشنهادات 73

5-1نتیجه گیری 74

5-2پیشنهادات 76

ضمائم 77

مشکلات نشت هیدروژن سولفید 78

دستگاه توتال سولفور 79

سولفورسنج فرآورده های نفتی 80

منابع 81

فهرست جداول

جدول1-1 :ترکیبات انواع بنزین 11

جدول1-2 :درصد وزنی اجزا 13

جدول1-3 :مقایسه بین درصد وزنی و حجمی بنزین سوپر و یورو4 14

جدول1-4 :مقایسه بین آلاینده ها در اردیبهشت 93 15

جدول1-5 : مقایسه بین آلاینده ها در اردیبهشت92 16

جدول 2-1:انواع کاتالیست و کاربردش 28

جدول2-2:فاز فعال آهن و مولیبدن 33

جدول3-1 :وزن کاتالیست ها 45

جدول3-2 :شرایط آزمایش 45

جدول4-1 :سطوح مورد بررسی 54

جدول4-2:طراحی آزمایش برای پارامترهای معرفی شده توسط روش تاگوچی 55

جدول4-3 :آزمایشات اولیه برای بدست آوردن محدوده قابل کنترل شرایط آزمایش 56

جدول4-4 :نتایج آزمایشات انجام شده برای بهینه سازی ساختاری کاتالیست 56

جدول4-5 :نتایج حاصل از دو نرم افزار 57

جدول4-6 :نتایج حاصل از نرم افزار minitab 58

جدول4-7 :نتایج آزمایشات فشار پس از آنالیز 61

جدول4-8 :نتایج آزمایشات سرعت فضایی پس از آنالیز 62

جدول4-9 :نتایج آزمایشات دما پس از آنالیز 63

جدول4-10 :نمونه هایی از مدل سینتیکی 67

جدول4-11 :نتایج آزمایشات سینتیکی 69

جدول4-12 : سرعت مصرف تیوفن 71

جدول4-13 : پارامترهای ارائه شده توسط روش سیمپلکس به 72

کمک نرم افزارsolverبراساس روش بهینه سازی نیوتنی

فهرست نموارها

نمودار4-1:مدل سازی نتایجMo با نرم افزار minitab 59

نمودار4-2: مدل سازی نتایج Coبا نرم افزار minitab 59

نمودار4-3: مدل سازی نتایجTiO₂با نرم افزار minitab 60

نمودار4-4:تغییرات میزان تبدیل تیوفن 70

فهرست اشکال

شکل2-1 :merox unitواحد 300 38

2-1-1-1) احتیاج یا نیاز (Need) ……………….. 16

2-1-1-2)خواسته‏ ( Want) ………………………. 17

2-1-1-3)تقاضا (Demand) ………………………. 17

2-1-1-4)محصول (Product) ………………………. 17

2-1-1-5)مبادله (Exchange) …………………….. 18

2-1-1-6)معامله (Transaction) …………………… 19

2-1-1-7) بازار (Market) ………………………. 19

2-1-2)مدیریت بازاریابی………………………. 20

2-1-3)آمیخته بازاریابی……………………… 20

2-1-4) بازاریابی خدمات بانکی………………… 21

2-2 بازاریابی خدمات

2-2-1) بازاریابی خدمات………………………. 25

2-2-2) ماهیت و ویژگی خدمات……………………. 26

2-2-2-1) ناملموس بودن………………………… 26

2-3-2-2) تفكیك‎ ناپذیری……………………….. 26

2-3-2-3) ناهمگونی……………………………. 27

2-3-2-4) فناپذیری……………………………. 27

2-3-3) آمیخته بازاریابی خدمات…………………. 28

2-2-4)مزیت رقابتی در خدمات……………………. 29

2-2-5)مدل مفهومی پژوهش……………………….. 30

2-2-5-1)محصول……………………………… 31

2-2-5-2)قیمت………………………………. 32

2-2-5-3)توزیع……………………………… 32

2-2-5-4)ترفیع……………………………… 33

2-2-5-5)کارکنان……………………………. 33

2-2-5-5-1)شایستگی کارکنان…………………. 34

2-2-5-5-2) اهمیت كاركنان در ارائه خدمات با كیفیت 35

2-2-5-5-3)گزینش کارکنان مناسب……………… 37

2-2-5-5-4)آموزش و باز آموزی کارکنان………… 38

2-2-5-5-5)رایج ساختن استاندارهای کیفیت و ارزیابی دائمی میزان رعایت آنها در کارکنان……………………. 38

2-2-5-6)امکانات و دارائی های فیزیکی ملموس………. 38

2-2-5-6-1)نقش شواهد فیزیکی بانک و شایستگی کارکنان در رضایت، جذب و حفظ مشتریان……………………………… 40

2-2-5-7)مدیرت باجه یا فرایند…………………. 41

2-2-6) استراتژی های آمیخته بازاریابی…………… 41

2-2-6-1) استراتژی های محصول………………. 42

2-2-6-2)استراتژی های قیمت………………… 42

2-2-6-3) استراتژی های مکان……………….. 42

2-2-6-4) استراتژی های ترفیع و بازار افزایی…. 42

2-2-6-5) استراتژی های مربوط به کارکنان…….. 42

2-2-6-6)استراتژی های مربوط به دارایی ها یا امکانات فیزیکی و فرایند ها………………………………. 43

2-2-7) مفهوم جدید خدمت به مشتریان…………….. 44

2-2-8) خدمت به مشتری، مهمترین تعهد سازمانی……… 45

2-2-9) اهمیت دادن به مشتری یا ارباب رجوع……….. 45

2-2-10) اهمیت ارائه خدمت به مشتریان…………… 46

2-2-11) آینده خدمات………………………….. 46

2-2-8) خدمت به مشتری، مهمترین تعهد سازمانی……… 45

2-2-8) خدمت به مشتری، مهمترین تعهد سازمانی……… 45

2-2-8) خدمت به مشتری، مهمترین تعهد سازمانی……… 45

 

2-3 كیفیت خدمات

2-3-1) مفهوم كیفیت خدمات……………………… 47

2-3-1-1) بی نهایت بزرگ……………………….. 48

2-3-1-2) محصول محور………………………….. 48

2-3-1-3) فرآیند یا عرضه محور………………….. 48

2-3-1-4) مشتری محور………………………….. 49

2-3-1-5) ارزش محور…………………………… 49

2-3-2) اهمیت كیفیت خدمات……………………… 50

2-3-2-1)افزایش انتظارات مشتریان……………… 51

2-3-2-2) فعالیت رقبا…………………………. 51

2-3-2-3) عوامل محیطی…………………………. 51

2-3-2-4) ماهیت خدمات…………………………. 52

2-3-2-5) عوامل درون سازمانی…………………… 52

2-3-2-6) مزایای ناشی از كیفیت خدمات……………. 52

2-3-3)بازارگراییو كیفیت خدمات……………….. 54

2-3-4)رویكردهای مدیریت كیفیت خدمات…………….. 55

2-3-4-1) واكنشی یا انفعالی……………………. 55

2-3-4-2) استراتژیك یا فعالانه………………….. 56

2-3-5) پیامدهای كیفیت خدمات…………………… 57

2-3-6) كیفیت خدمات و تصمیمات بازاریابی رقابتی…… 59

 

2-4 جذب مشتری و رضایت مندی

2-4-1)مفاهیم و تعاریف مشتری مداری……………… 61

2-4-2) چارچوبی برای ارزیابی میزان مشتری‎مداری……. 64

2-4-3)مفهوم رضایت ………………………….. 66

2-4-3-1)رضایت مشتری………………………….. 67

2-4-3-2) نارضایتی مشتری………………………. 67

2-4-4)رضایت مشتری هسته فعالیت‎های بازاریابی……… 67

2-4-4)ساختار فرایند نظام كلی خدمات رضامندی مشتری… 69

2-4-4-1)مفهوم و سیاست رضامندی مشتری……………. 70

2-4-4-2) تحقیقات بازاریابی و تحلیل نیازهای مشتری… 81

2-4-4-3) برنامه‎ریزی برای مشتری پسندكردن محصولات و خدمات 71

2-4-4-4) بازار و فروش محصولات و خدمات…………… 72

2-4-4-5) مشتری پسند كردن تحویل………………… 71

2-4-4-6)ایجاد رضامندی برای مشتری………………. 72

2-4-5) جمع‎آوری و تحلیل اطلاعات درباره رضامندی مشتری. 72

2-4-6) مزایای رضایت مشتری…………………….. 72

2-4-7)هفت دستور طلایی برای جلب رضایت مشتری………. 74

2-5بانك­داری

2-5-1)آغاز بانك­داری………………………….. 75

2-5-2)روش های نوین مشتری مداری و بازاریابی علمی در بانك­داری ایران………………………………………….. 76

2-5-3)مشتریان منابع نامشهود بانک­ها…………….. 78

2-5-4) خدمات داخلی بانکی……………………… 81

2-5-5)رضایت مشتریان و ارباب رجوع (برون سازمانی)…. 83

2-5-5-1)اهمیت رضایت مندی مشتری………………… 83

2-5-5-2)مزایای رضایت مشتری……………………. 83

2-5-6)کیفیت خدمات بانکی برای مشتریان…………… 85

2-5-6-1)تعیین و تبیین ماموریت شركت در راستای منافع و خواسته های مشتری……………………………………… 85

2-5-6-2)درگیر ساختن و متعهد كردن دائمی مدیریت ارشد در پیشبرد كارها……………………………………… 86

2-5-6-6)استفاده از تكنولوژی برای دستیابی به رضایت مشتری 86

2-5-6-7)خلاقیت برای حركت به فراسوی انتظارات مشتری… 86

2- 6تاریخچه پژوهش

2-6-1)پیشینه تحقیق…………………………… 88

2-6-1-1)پیشینه داخلی…………………………. 88

2-6-1-2)پیشینه خارجی…………………………. 92

فصل سوم روش تحقیق

3-1)مقــدمه…………………………………. 96

3-2)روش تحقیق……………………………….. 96

3-3 ) جامعه و نمونه آماری…………………….. 97

3-3-1) جامعه آماری تحقیق……………………… 97

3-3-2 ) نمونه و روش نمونه گیری تحقیق…………… 97

3-4)روش گردآوری داده ها و اطلاعات………………. 99

3-5) روایی یا اعتبار ابزار تحقیق……………… 100

3-6)قابلیت اعتمادیا پایایی ابزار تحقیق……….. 100

3-7 )روش تجزیه و تحلیل داده ها و اطلاعات……….. 101

3-7-1)آزمون فریدمن………………………….. 102

 

فصل چهارم تجزیه تحلیل داده ها

4-1) مقدمه…………………………………. 104

4-2) آمار توصیفی پاسخ دهندگان………………… 104

4-2-1) جنسیت پاسخ­گویان………………………. 105

4-2-2) درآمد پاسخ­گویان……………………… 106

4-2-3) مدت زمان استفاده از خدماتبانک توسعه تعاونتوسط پاسخ­گویان………………………………………….. 107

4-2-4) تحصیلات پاسخ­گویان……………………… 109

4-4) نتایج تحلیل آماری فرضیه­ها……………….. 109

4-4-1) نتیجه تحلیل آماری فرضیه اول……………. 109

4-4-2) نتیجه تحلیل آماری فرضیه دوم……………. 110

4-4-3) نتیجه تحلیل آماری فرضیه سوم……………. 111

4-4-4) نتیجه تحلیل آماری فرضیه چهارم………….. 112

4-4-5) نتیجه تحلیل آماری فرضیه پنجم…………… 113

4-4-6) نتیجه تحلیل آماری فرضیه ششم……………. 114

4-4-7) نتیجه تحلیل آماری فرضیه هفتم…………… 115

4-4-8) نتیجه تحلیل آماری فرضیه اصلی…………… 116

4-4-8 )بررسی میزان اهمیت سوالات پرسشنامه……….. 117

4-5) اولویت­بندی عوامل آمیخته بازاریابی خدمات…… 120

4-6) بررسی نتایج آزمون كراسكال والیس بر اساس تحصیلات 121

4-7- بررسی نتایج آزمون كراسكال والیس بر اساس میزان درآمد 123

فصل پنجم نتیجه گیری و پیشنهادات

5-1) نتیجه گیری…………………………….. 128

5-1-1 نتیجه گیری فرضیه اول…………………… 128

5-1-2 نتیجه گیری فرضیه دوم…………………… 128

5-1-3 نتیجه گیری فرض سوم…………………….. 129

5-1-4 نتیجه گیری فرضیه چهارم…………………. 129

5-1-5 نتیجه گیری فرضیه پنجم………………….. 130

5-1-6 نتیجه گیری فرضیه ششم…………………… 130

5-1-6 نتیجه گیری فرضیه هفتم………………….. 130

5-1-6 نتیجه گیری فرضیه اصلی………………….. 131

5-1-7 نتایج سایر یافته های پژوهش……………… 131

5-2) پیشنهادات……………………………… 131

5-2-1 پیشنهادات بر مبنای نتایج پژوهش………….. 131

5-2-2 پیشنهادات پژوهشی………………………. 133

منابع فارسی…………………………………………………………………………………………………………………….135

منابع لاتین………………………………………………………………………………………………………………………..138

پیوست……………………………………………………………………………………………………………………………140

چکیده

1-5) چهارچوب نظری 6

نمودار1-1- مدل اندازه گیری رقابت پذیری 6

1-6) مدل تحقیق: 6

نمودار1-2- مدل مفهومی تحقیق 7

1-7) فرضیات یا سوالات تحقیق: 7

1-8) روش تحقیق 8

1-9) جامعه تحقیق 8

1-9-1) قلمرو مکانی 8

1-9-2) قلمرو زمانی 9

1-9-3) قلمرو موضوعی 9

1-10) جامعه آماری 9

1-11) روش و ابزار جمع آوری اطلاعات 9

1-12) روش تجزیه وتحلیل 9

1-13) تعاریف اصطلاحات و متغیرهای تحقیق 10

1-13-1)گات 10

1-13-2) سازمان تجارت جهانی 10

1-13-3) رقابت پذیری 10

1-13-4) منابع داخلی 11

1-13-5) موقعیت در بازار 11

1-13-6) توان خلاقیت 11

فصل دوم-مطالعات نظری

گفتار اول- ﻣﻔﻬﻮﻡ ﺭﻗﺎﺑﺖﭘﺬﻳﺮﻱ

2-1-1) مقدمه 13

2-1-2) ﺭﻭﻳﻜﺮﺩﻫﺎﻱ ﻣﺮﺗﺒﻂ ﺑﺎ ﺭﻗﺎﺑﺖﭘﺬﻳﺮﻱ 15

2-1-2-1) دیدگاه مبتنی بر منابع 17

2-1-2-1-1) سرمایه سازمانی 18

2-1-2-1-2) سرمایه انسانی 20

2-1-2-1-3) سرمایه مالی 20

2-1-2-2) دیدگاه موقعیت در بازار 21

2-1-2-2-1)سرمایه مشتری22

2-1-2-2-2) هوشمندی رقابتی 22

2-1-2-3) دیدگاه مبتنی بر توان خلاقیت و نوآوری 23

2-1-2-3-1)سرمایه نوآوری23

2-1-2-3-2) توان فناوری اطلاعات 24

2-1-2-3-3) مدیریت دانش 24

2-1-3) ﻣﻄﺎﻟﻌﺎﺕ ﭘﻴﺸﻴﻦ 25

ﺟﺪﻭﻝ 2-1-1 ‐ ﭘﻴﺸﻴﻨﻪ ﺗﺤﻘﻴﻘﺎﺗﻲ ﺗﻮﺍﻥ ﺭﻗﺎﺑﺘﻲ 28

گفتار دوم- سازمان تجارت جهانی

2-2-1) مقدمه 31

2-2-2) مبانی نظری 32

2-2-2-1) نظریه مركانتیلیسم 32

2-2-2-2) نظریه مزیت مطلق آدام اسمیت 32

2-2-2-3) نظریه مزیت نسبی ریكاردو 33

2-2-2-4) نظریه هزینه فرصت 35

2-2-2-5) نظریه مزیت نسبی هكشر و اوهلین 36

2-2-2-6) نظریه مزیت نسبی لیندر 38

2-2-2-7) آزمون تجربی لئونتیف 39

2-2-2) موافقتنامه عمومی تعرفه و تجارت 40

2-2-3-1) اصل عدم تبعیض 41

2-2-3-2) اصل تثبیت و كاهش تعرفه 42

2-2-3-3) اصل مشورت 42

2-2-3-4) اصل حفاظتها 42

2-2-4) مذاكرات چند جانبه گات 43

2-2-5) ایجاد سازمان تجارت جهانی 44

2-2-6) تفاوتهای گات با سازمان تجارت جهانی 45

2-2-7) ساختار سازمان جهانی تجارت 46

2-2-7-1) كنفرانس وزیران 46

2-2-7-2) شورای عمومی 46

2-2-7-3) كمیته ها 47

2-2-7-4) دبیرخانه 47

2-2-7-5) رویه تصمیم گیری 48

2-2-8) اهداف و وظایف سازمان تجارت جهانی 48

2-2-9) مذاكرات تجاری پس از تأسیس 49

2-2-10 )عضویت در سازمان تجارت جهانی 53

2-2-10-1 ) مشكلات و پیچیدگیهای الحاق 54

2-2-10-2 ) نقش و وظیفه آنكتاد 55

2-2-10-3) فرایند الحاق 55

2-2-10-4) اعضای اصلی 56

2-2-10-5) اعضای ناظر 56

2-2-10-6) اعضای دوفاکتو 57

2-2-10-7) عضویت موقت 57

نمودار (2-2-2) تشریفات الحاق 58

2-2-11) سازمان تجارت جهانی و كشورهای در حال توسعه 58

2-2-12) ایران و سازمان تجارت جهانی 60

2-1-12-1) الحاق ایران به سازمان تجارت جهانی 60

2-2-12-2) مراحل هفت گانه عضویت ایران 61

2-2-12-3) گاه شمار الحاق ایران به سازمان جهانی تجارت 63

2-2-13) مزیتهای عضویت در سازمان تجارت جهانی 69

2-2-14) چالشها و فرصتها در فرایند جهانی شدن اقتصاد 70

الف ) چالشها 70

ب ) فرصتها 71

گفتار سوم- تولید ماشین آلات راهسازی

2-3-1) مقدمه 75

2-3-2) سابقه تاریخی تولید ماشین آلات راهسازی 75

جدول 2-3-1 ارزش واردات بر اساس دلار آمریکا 78

گفتار چهارم – پیشینه تحقیق

2-4-1) مقدمه 79

جدول 2-4-1 مقایسه پژوهش های پیشین 86

فصل سوم-روش شناسی تحقیق

3-1) مقدمه 88

نمودار 3-1 مراحل انجام تحقیق 89

3-2-1) طبقه بندی تحقیق بر مبنای روش 90

3-2-2) نوع پژوهش از نظر اجرا 91

3-3-1) قلمرو موضوعی 91

3-3-2) قلمرو زمانی 91

3-3-3) قلمرو مکانی 91

3-5) روش گردآوری داده ها و اطلاعات 92

جدول 3-2 ساختار کلی پرسشنامه ها 94

3-6) ابزار گردآوری داده ها 94

3-6-1) مقیاس و طیف ابزار اندازه گیری تحقیق 95

3-7-1) روایی( اعتبار) ابزار پژوهش 97

3-7-1-1) روایی صوری 98

3-7-1-2) روایی محتوا 98

جدول 3-4 حداقل CVR مورد قبول 99

جدول 3-5 نتایج مرتبط با نسبت اعتبار محتوا 99

3-7-2) پایایی (قابلیت اعتماد) ابزار پژوهش 100

جدول 3-6: ضریب آلفای کرونباخ 101

3-7-3) روایی و اعتبار مرکب 102

جدول شماره 3-7: مقادیر پایایی مرکب و روایی همگرا 102

3-8-1) تقسیم بندی متغیرها براساس رابطه 103

3-8-2) تعریف عملیاتی متغیرها 103

جدول 3-8 شاخص های متغیرهای تحقیق 104

3-9-1) معرفی روش PLS 105

فصل چهارم-تجزیه و تحلیل یافته های تحقیق

4-1) مقدمه 109

4-2) آمار توصیفی 109

4-2-1) توصیف ویژگی های جمعیت شناختی 109

جدول (4-1). توزیع فراوانی پاسخدهندگان برحسب جنسیت 110

نمودار (4-1). درصد فراوانی پاسخدهندگان برحسب جنسیت 110

جدول (4-2). توزیع فراوانی پاسخدهندگان برحسب سن 110

نمودار (4-2). درصد فراوانی پاسخدهندگان برحسب سن 111

جدول (4-3). توزیع فراوانی پاسخدهندگان برحسب تحصیلات 111

نمودار (4-3). درصد فراوانی پاسخدهندگان برحسب میزان تحصیلات 112

جدول (4-4). توزیع فراوانی پاسخدهندگان برحسب سابقه خدمت 112

نمودار (4-4). درصد فراوانی پاسخدهندگان برحسب سابقه کار 113

4-2-2) جداول توافقی 113

4-2-2-1) جدول توافقی جنسیت، سن و رقابت پذیری 113

جدول 4-5- جدول توافقی جنسیت، سن و رقابت پذیری 113

4-2-2-2) جدول توافقی تحصیلات، سن و رقابت پذیری 114

جدول 4-6- جدول توافقی سن، تحصیلات و رقابت پذیری 114

4-2-2-3) جدول توافقی سابقه کاری، جنسیت و رقابت پذیری 115

جدول 4-7- جدول توافقی جنسیت، سابقه کاری و رقابت پذیری 115

4-2-3) آمار توصیفی متغیرهای تحقیق 116

جدول 4-8- شاخصهای مرکزی، پراکندگی و توزیع متغیرها 116

4-3) آمار استنباطی 117

جدول 4-9- سطح معنی داری آزمون كولموگروف – اسمیرنف 118

4-3-2) آزمون فرضیات تحقیق 118

4-3- 2-1) مدل بیرونی (مدل اندازه گیری) 119

جدول 4-10- کدگذاری متغیرها 120

نمودار 4-5- مدل کلی پژوهش با تکنیک حداقل مربعات جزئی 121

نمودار 4-6- آماره تی مدل کلی پژوهش 122

جدول 4-11- مدل بیرونی حداقل مربعات جزئی 122

جدول 4-12- مقدار بوت استراپینگ حداقل مربعات جزئی 122

4-4) آزمون فرضیه های پژوهش 123

4-4-1) ارزیابی مدل ساختاری 123

4-4-2) معیار نیکویی برازش 124

جدول شماره 4-13: نتایج حاصل از مدل معادلات ساختاری 125

4-4-3) آزمون فرضیات تحقیق 125

4-5) رتبه بندی ابعاد 127

جدول 4-14- رتبه بندی ابعاد متأثر از الحاق به WTO 127

فصل پنجم-نتیجه گیری و پیشنهادات

5-1) مقدمه 129

5-2) نتایج تحقیق 129

5-2-1) منابع داخل صنعت 130

5-2-2) موقعیت در بازار 130

5-2-3) توان خلاقیت و نوآوری 131

جدول 5-1 مقایسه نتایج با تحقیقات پیشین 131

5-3) پیشنهادات 133

5-4) پیشنهادات برای تحقیقات آتی 135

5-5) مشکلات تحقیق 135

فهرست منابع و مآخذ 137

الف) منابع فارسی 137

ب) منابع لاتین 141

ج) وبسایت ها 143

پیوست 144

فصل اول