1-10- پری بیوتیک­ها.. 14

1-11- باکتری­های بی­هوازی احیاکننده سولفات.. 15

1-12- نقش باکتری­های احیا کننده سولفات در طبیعت.. 15

1-13- نقش باکتری­های احیا کننده سولفات در صنعت نفت.. 16

1-14- خوردگی میکروبی.. 16

1-15- واکنش­های احیای ترموشیمیایی سولفات.. 17

1-16- سیستم­های آلوده به SRB.. 17

1-17- اهداف، فرضیات و پرسش اصلی پژوهش.. 18

1-17-1 اهداف اصلی.. 18

1-17-2 اهداف اختصاصی.. 18

1-17-3 اهداف کاربردی.. 18

1-17-4 فرضیات پژوهش.. 18

1-17-5 پرسش اصلی پژوهش.. 18

فصل دوم:پیشینه پژوهش

2-1- پژوهش­های انجام گرفته در سطح جهان.. 20

2-2- پژوهش­های انجام گرفته در ایران.. 23

فصل سوم:روش شناسی تحقیق

3-1- مواد و روش کار.. 25

3-2- محیط کشت مورد نیاز.. 26

3-3- انتخاب بیماران مورد نظر برای نمونه­برداری.. 26

3-4- ارزیابی تاثیر آنتی بیوتیک ها برروی باکتری­های SRB.. 30

3-4-1 آنتی بیوتیک کلیندامایسین.. 30

3-4-2 آنتی بیوتیک جنتامایسین.. 31

3-4-3 آنتی بیوتیک مترونیدازول.. 31

3-5- ارزیابی خواص ضدمیکروبی آنتی بیوتیک­ها بر باکتری­های SRB مثبت 32

3-6- تعیین هویت مولکولی باکتری­های SRB مثبت.. 33

3-7- آنالیز آماری.. 33

 

 

فصل چهارم:نتایج یافته های تحقیق

4-1- مقدمه.. 35

4-2- تجزیه و تحلیل نتایج جمعیت شناختی.. 35

4-2-1 جنسیت.. 36

4-2-2 سن.. 37

4-2-3 میزان تحصیلات.. 38

4-2-4 میزان درآمد.. 39

4-3- ارزیابی فرضیات پژوهش.. 40

4-3-1 فرضیه اول.. 40

4-3-2 فرضیه دوم.. 43

4-3-3 فرضیه سوم.. 45

4-3-4 فرضیه چهارم.. 47

4-3-5 فرضیه پنجم.. 48

4-3-6 فرضیه ششم.. 50

4-4- نتایج آزمایش PCR.. 54

.. 54

4-4-2 تأیید PCR ژن16S rRNA.. 55

4-4-3 توالی تعیین ترادف شده قطعه 16S rRNA.. 56

4-4-4 آنالیز فیلوژنتیکی.. 57

فصل پنجم:بحث و نتیجه گیری

5-1- بحث.. 63

5-2- نتیجه گیری.. 67

5-3- پیشنهادات.. 67

منابع و مآخذ.. 68

فهرست منابع فارسی.. 68

فهرست منابع انگلیسی.. 70

چکیده انگلیسی.. 73

 

 

 

 

 

 

فهرست جداول

عنوان شماره صفحه

جدول 3-1: پرسشنامه مورد استفاده در این پژوهش. 25

جدول 3-2: ترکیبات محیط کشت API 26

جدول 3-3: خصوصیات بالینی افراد انتخاب شده برای نمونه­برداری 28

جدول 4-1: توزیع فراوانی و افراد بر حسب جنسیت. 36

جدول 4-2: فراوانی افراد مورد پژوهش بر حسب گروههای سنی. 37

جدول 4-3: توزیع فراوانی و در پاسخ دهندگان بر حسب میزان تحصیلات 38

جدول 4-4: فراوانی افراد مورد پژوهش بر حسب میزان درآمد 39

جدول 4-5: فراوانی افراد مورد پژوهش بر حسب گروه های سنی و بیماری 40

جدول 4-6: ضریب همبستگی متغیرهای سن افراد و بیماری. 42

جدول 4-7: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس درامد و بیماری 43

جدول 4-8: ضریب همبستگی متغیرهای سن افراد و بیماری. 44

جدول 4-9: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس سابقه بیماری و بیماری 45

جدول 4-10: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس جنسیت و سابقه مصرف آنتی­بیوتیک. 47

جدول 4-11: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس گروه سنی و تحصیلات 48

جدول 4-12: ضریب همبستگی متغیرهای تحصیلات افراد و بیماری 49

جدول 4-13: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس گروه های سنی وتاثیر آنتی­بیوتیک­ها. 50

جدول 4-14: ضریب همبستگی متغیرهای سن و تاثیر داروی. 51

جدول 4-15: ضریب همبستگی متغیرهای سن و تاثیر داروی جنتامایسین 52

جدول 4-16: ضریب همبستگی متغیرهای سن و تاثیر داروی مترونیدازول 53

 

 

 

 

فهرست نمودارها

عنوان شماره صفحه

نمودار 4-1: فراوانی و نسبت افراد مورد پژوهش بر حسب جنس 36

نمودار 4-2: توزیع درصد نمونه آماری افراد برحسب سن. 36

نمودار 4-3: فراوانی افراد مورد پژوهش بر حسب میزان تحصیلات 38

نمودار 4-4: توزیع در صد نمونه آماری افراد بر حسب میزان درآمد 39

نمودار 4-5: نمودار توافقی سن و بیماری آپاندیسیت. 41

نمودار 4-6: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس آپاندیسیت 41

نمودار 4-7: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس درامد و بیماری 43

نمودار 4-8: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس سابقه بیماری و بیماری آپاندیسیت. 46

نمودار 4-9: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس سابقه بیماری و بیماری عفونت روده. 46

نمودار 4-10: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس جنسیت و سابقه مصرف آنتی­بیوتیک. 47

نمودار 4-11: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس گروه سنی و تحصیلات 48

نمودا 4-12: ارزیابی تاثیر کیفی داروی کلیندامایسین بر باکتری­های احیا کننده سولفات جدا شده از گروه­های سنی. 51

نمودار 4-13: ارزیابی تاثیر کیفی داروی جنتامایسین بر باکتری های احیا کننده سولفات جدا شده از گروه های سنی. 52

نمودار 4-14: ارزیابی تاثیر کیفی داروی مترونیدازول بر باکتری­های احیا کننده سولفات جدا شده از گروه­های سنی. 53

 

 

 

فهرست شکل ها

عنوان شماره صفحه

شکل 1-1: آپاندیس ملتهب و متورم (آپاندیسیت).. 6

شکل 1-2: فلور طبیعی روده.. 10

شکل 3-1: مرحله جداکردن زائده آپاندیس.. 27

شکل 3-2: تلقیح باکتری­های SRB)) به محیط مایع API. 30

شکل 3-3: تاثیر آنتی بیوتیک­ها بر رشد باکتری های SRB.. 32

شکل 4-1: تصویر الکتروفورز حاصل از DNA استخراج شده از باکتری. 54

شکل 4-2: تصویر الکتروفورز حاصل از تکثیر ژن 16S rRNA باکتری. 55

 

 

 

چکیده

باکتری­های احیا کننده سولفات (SRB) گروه بزرگی از میکروارگانیسم­های بی­هوازی هستند که نقش بسیار مهمی در بسیاری از فرآیندهای بیوژئوشیمیایی ایفا می­کنند. این پژوهش با هدف شناسایی وتعیین هویت مولکولی باکتری­های احیا کننده سولفات و نقش آن­ها در عفونت­های روده بزرگ و آپاندیسیت در شهر کرمان انجام شد. روش کار: این پژوهش به صورت مقطعی-توصیفی در سال 1391 تا 1392 بر روی 50 بیمار مراجعه کننده به بیمارستان­های مختلف شهر کرمان انجام شد. تمامی افراد مورد بررسی دارای مشکلات عفونت روده بزرگ ویا آپاندیسیت بودند. در بین این افراد نمونه­گیری از حفره شکم و روده ی بزرگ انجام شد. سپس نمونه­های تهیه شده به محیط کشت اختصاصی API تلقیح و 2 ماه در دمای 35 درجه سانتی گراد گرماگذاری شدند. سپس نمونه­های مثبت پس از کشت مجدد در محیط جامد اختصاصیSRB ، برای خالص سازی بیشتر به محیط جدید API منتقل گردید. شناسایی مولکولی جدایه ها با استفاده از پرایمر یونیورسال 16s rRNA و مقاومت آنتی بیوتیکی صورت گرفت. از مجموع نمونه­های مورد پژوهش از6 مورد (12%) نمونه­های مشکوک به SRB جداسازی گردید. اما با روش مولکولی در4 مورد (8%) باکتری های احیا کننده سولفات شناسایی شد. بیشترین گونه ی باکتری­های (SRB) مربوط به سویهDesulfovibrio pigerبود. همچنین بین جداسازی باکتری­های SRB، سن و میزان تحصیلات افراد ارتباط معنی­داری مشاهده شد مناسب­ترین آنتی­بیوتیک برای حذف باکتری­های SRB کلیندامایسین شناسایی شد. با توجه به نقش احتمالی باکتری­های SRB در ایجاد سرطان کلون و عفونت­های روده­ای، ضرورت انجام پژوهش­های تکمیلی و پایش مداوم بالینی در جمعیت­های گسترده تر و ارزیابی نقش بیوسایدها وآنتی­بیوتیک­ها در حذف این باکتری­ها وجود دارد.

واژگان کلیدی:باکتری­های احیا کننده سولفات، عفونت­های روده بزرگ، 16s rRNA

مقدمه

باکتری­های احیا کننده سولفات SRB به طور وسیعی در اقیانوس، آب­های شیرین، لجن­ها پراکنده­اند. این باکتری­ها از سولفات به عنوان پذیرنده نهایی الکترون استفاده و سولفید هیدروژن تولید می­نمایند. تا اکنون 14 جنس از این گروه باکتری­ها شناخته شده که به جز دسولفونما ویبرو تمامی آن­ها گرم منفی می­باشند. یک جنس از این باکتری­ها به نام دسولفوویبرو می­تواند در هنگام تکثیر فعال خود بیش از 10 گرم در لیتر سولفید هیدروژن تولید نماید (آبیارد 1382، 12-11؛ ;Geneva 2001, 157 Collette 1999, 198 ).